無(wú)菌操作的注意事項（2）

我們這篇文章主要講述幾個(gè)常見(jiàn)實(shí)驗操作的注意事項。包括：擦拭、加蓋、灼燒、移液；

01 擦拭

實(shí)驗過(guò)程中需要擦拭的對象有工作臺面、手套、瓶皿/孔板表面、耗材/器械表面。

對于工作臺面，在實(shí)驗開(kāi)始前，結束后都需要試用70%乙醇擦拭，如果實(shí)驗過(guò)程中出現液體滴落在臺面，也需要擦拭臺面后才能繼續實(shí)驗；

對于手套，除了佩戴一次性滅菌處理過(guò)的手套外，整個(gè)實(shí)驗過(guò)程都應間隔一段時(shí)間就擦拭手套一次；

對于瓶皿/孔板，如果實(shí)驗過(guò)程中被拿出過(guò)生物安全柜范圍以外，那么再次放回生物安全柜或培養箱之前，都應該用70%乙醇進(jìn)行外表面擦拭；

對于耗材/器械表面，如果是一次性耗材，觸碰了實(shí)驗臺面、或其他實(shí)驗耗材/器械/手套等的外表面，都應該扔棄不再試用；如果是非一次性的器械，出現上述誤觸，則應該立即用70%乙醇擦拭整個(gè)可能被污染的區域。

02 加蓋

對于需要反復使用的含蓋的器皿，當實(shí)驗結束后，清洗瓶蓋時(shí)，應該注意清潔瓶蓋內側，包括含橡膠墊的部分。

有條件的實(shí)驗室，可以在器皿蓋上蓋子后，使用70%乙醇擦拭外表面，然后再通過(guò)外層包裹錫箔紙的方式，來(lái)盡可能降低外部環(huán)境灰塵沉積在蓋子和器皿之間縫隙的現象。

03 灼燒

灼燒是一種可以去除顆粒性灰塵或棉絨的有效辦法，火焰也會(huì )造成附近的氣流上升，避免灰塵沉降。

但是，在生物安全柜內，點(diǎn)燃酒精燈進(jìn)行灼燒是不合適的。

生物安全柜工作時(shí)，會(huì )為內部空間提供一個(gè)穩定的層流，但酒精燈的火焰會(huì )對它產(chǎn)生干擾，進(jìn)而影響內部的無(wú)菌環(huán)境，提高了生物污染的風(fēng)險。

04 移液

移液部分，我們分為小體積移液、大體積移液和溶液傾倒轉移來(lái)講解。

對于小體積移液，一般特指小于1mL的液體轉移，因為其體積小，通常需要使用移液器來(lái)操作。

而小體積的移液吸頭比較短，在吸液的過(guò)程中有可能出現移液器下端也進(jìn)入瓶皿內部的情況。

此時(shí)就需要特別注意，不能讓移液器碰觸到瓶皿內壁，如果碰觸了，則應該立即使用70%乙醇清潔移液器下端，然后才可以繼續往下進(jìn)行實(shí)驗操作。

對于大體積移液，例如5/10/25mL或以上的液體轉移，可以用大量程的移液吸頭或大量程的電動(dòng)移液器輔助移液。

但不管是什么體積的移液，都應該確保吸頭或移液管的末端內是含有棉花或透氣膠塞的，這樣可以有效避免因為移液過(guò)程中，液體吸入移液器內部造成污染。

但由于大體積移液的液體轉移速度快、量大，有時(shí)候即使有棉花，也會(huì )出現液體被吸入移液器內的現象，這時(shí)就只能停止實(shí)驗，或改用其他未被污染的移液器來(lái)操作了。

關(guān)于溶液傾倒，有時(shí)液體的轉移不需要特別精準，會(huì )把溶液從一個(gè)瓶?jì)戎苯拥谷肓硪粋€(gè)瓶?jì)然蚬軆取?/span>

在操作時(shí)，需要注意溶液從原來(lái)的容器中倒入新的容器時(shí)，瓶口應保持懸空，而不是直接接觸新容器的瓶口邊緣來(lái)完成液體轉移。

因為后者會(huì )容易出現液橋，即液體在兩個(gè)挨得很近的接觸面之間形成的水柱，這樣的水柱容易被微生物進(jìn)入；同時(shí)，在傾倒的時(shí)候也要注意不要讓液體流淌在容器的外表面，因為這樣也會(huì )提高微生物污染的風(fēng)險。

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