無(wú)菌操作的注意事項（1）

細胞培養需要無(wú)菌技術(shù)。

什么是無(wú)菌技術(shù)？它和普通的實(shí)驗操作有什么區別？

首先，無(wú)菌技術(shù)是通過(guò)制定一個(gè)嚴格的操作規范來(lái)約束每個(gè)人做實(shí)驗的行為規范，從而排除潛在的污染可能。其原則就是在外部環(huán)境的微生物和細胞之間建立起一道屏障。

這道屏障有兩層含義：

1.讓細胞從物理上和外部非無(wú)菌的物品隔絕，不讓它們直接接觸

2.設計實(shí)驗操作時(shí)，所有步驟不能讓細胞和外部非無(wú)菌環(huán)境建立直接聯(lián)系

說(shuō)白了，就是從各個(gè)環(huán)節、細節上去盡力做到?jīng)]有過(guò)失。

實(shí)驗操作臺面

在生物安全柜內進(jìn)行細胞培養操作，操作臺面的使用有以下注意事項：

1 用之前，無(wú)論上一個(gè)使用者是否有擦拭臺面，你都需要重新擦拭一次，并使用70%乙醇消毒臺面，再使用紫外照射消毒30分鐘以上；

2 操作臺面內只放和本次實(shí)驗操作有關(guān)系的實(shí)驗工具，放置時(shí)按照分類(lèi)和使用習慣來(lái)合理放置，切勿堆放在一起，也不要太靠近外部邊緣。

3.實(shí)驗過(guò)程中，如果培養瓶、培養皿、多孔板已打開(kāi)蓋子，那么手部和任何其他物品都不應該越過(guò)敞口上方，否則將可能把微生物帶入器皿內；

4.所有的實(shí)驗操作，都應該在你的視野范圍內進(jìn)行，也就是你在操作時(shí)，必須能看到實(shí)驗工具的整體，這是為了避免因盲區導致的實(shí)驗工具的末端觸碰到其他物品、臺面或你的身體部位，導致污染；

5.在實(shí)驗過(guò)程中，如果出現試劑、培養物液體滴在臺面，應停止當前操作，并立即用70%乙醇擦拭臺面；

6.實(shí)驗結束后，所有實(shí)驗物品都應搬離臺面，并再次擦拭清潔，最后用70%乙醇消毒；

個(gè)人衛生

1 穿實(shí)驗服、佩戴口罩和外科滅菌手套，長(cháng)頭發(fā)的同學(xué)應把頭發(fā)扎在腦后，佩戴的手套的上緣應該與實(shí)驗服的袖口重疊在一起，就是把袖口末端塞進(jìn)手套內；

2 手套在整個(gè)實(shí)驗過(guò)程中，不管是否有移出生物安全柜以外的范圍，都應間隔一段時(shí)間就使用70%乙醇擦拭一次；

3 如果感染了疾病，例如感冒，則應該暫緩實(shí)驗或佩戴面罩后再進(jìn)入細胞間做實(shí)驗；

4 實(shí)驗過(guò)程中，如果實(shí)驗操作者和培養物之間有玻璃間隔，可以說(shuō)話(huà)，但應該盡量少說(shuō)話(huà)。

試劑和培養基

1 從外部采購的試劑和培養基，如果有外包裝，包括紙盒、薄膜等，都應該在細胞間外去除后，再使用70%乙醇消毒外表面后才放入操作臺面；

2 如果實(shí)驗過(guò)程中，這些試劑、培養基曾拿出過(guò)生物安全柜以外的范圍，例如放入了冰箱、培養箱、水槽等，需要重新擦拭干凈后用70%乙醇消毒，然后才可以再次放入操作臺面內。

培養物

1. 在每一次實(shí)驗之前，先用肉眼觀(guān)察細胞是否正常沒(méi)有污染，并在顯微鏡下再次檢查確認，如果污染則應停止該次實(shí)驗并清理掉細胞；細胞拿進(jìn)生物安全柜之前，同樣需要用70%乙醇擦拭培養器皿外表面；

2 每一批次的細胞，在培養周期內，都應該取一部分出來(lái)單獨使用無(wú)抗生素的（血清）細胞培養基進(jìn)行培養檢測，判斷其是否有潛在污染，這是為了排除抗生素對污染的干擾。

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