Lipofectamine ™ RNAiMAX轉染

轉染是實(shí)驗過(guò)程中常用的技術(shù)操作，通俗來(lái)說(shuō)，常見(jiàn)的轉染即為把某種功能性質(zhì)粒轉到細胞中去，通過(guò)轉染試劑的作用在經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后，收集細胞通過(guò)WB、qpcr等來(lái)檢測質(zhì)粒是否正常發(fā)揮作用來(lái)達到我們實(shí)驗的某種需求；不同的質(zhì)粒通常有不同的轉染試劑和不同的方法，如PEI轉染、lipo2000轉染等。

Lipofectmine ™ RNAiMAX轉染主要供siRNA和Stealth ™ RNAi 雙鏈體轉染使用，具有轉染效率高、對細胞毒性小等優(yōu)點(diǎn)，分為正向轉染及反向轉染兩種方式。siRNA轉染比較常見(jiàn)，因此本文分享主要針對siRNA反向轉染。

轉染前準備

1.準備試劑包括：Opti-MEM培養基、Lipofectamine™ RNAiMAX試劑、siRNA、不加雙抗的10%FBS培養基、胰酶、PBS緩沖液等常見(jiàn)處理細胞的試劑。

2.反向轉染要求細胞密度≥90%。

轉染中

1.按正常處理細胞的流程將長(cháng)滿(mǎn)的細胞經(jīng)過(guò)胰酶消化離心后去上清，注意此處需要加無(wú)雙抗的10%FBS培養基1ml進(jìn)行細胞重懸，重懸完后根據細胞生長(cháng)速度鋪細胞，保證轉染完后24h細胞密度達到30-50%。

2.轉染復合物制備：根據說(shuō)明書(shū)制備轉染復合物，添加量如下表所示。

根據轉染的實(shí)際情況將Opti-MEM培養基、Lipofectamine™ RNAiMAX試劑、siRNA依次加入到一個(gè)無(wú)菌Ep管中，按照先加Opti-MEM培養基、再加siRNA最后加Lipofectamine™ RNAiMAX試劑的順序，輕輕混勻室溫孵育20min。

3.20min后依次將轉染復合物加入細胞培養皿種，輕輕混勻，放入細胞培養箱內。

轉染后

1.轉染后24h內最好不要挪動(dòng)細胞，也不要拿出在顯微鏡下觀(guān)察，期間也無(wú)需進(jìn)行細胞換液。

2.轉染后48h后，可拿出細胞觀(guān)察細胞形態(tài)有無(wú)變圓，肉眼觀(guān)察轉染效率，對于生長(cháng)較慢的細胞，其表型可能會(huì )在72h內逐漸顯現。根據細胞生長(cháng)情況可進(jìn)行換液，注意此時(shí)需要換含雙抗的血清培養基。

3.在顯微鏡下觀(guān)察細胞形態(tài)，若細胞變圓較為厲害，應在轉染后4天左右收細胞進(jìn)行轉染效率測定，時(shí)間太久細胞太少的話(huà)檢測難度較大。

4.此種轉染方式最長(cháng)可維持5-7天的基因敲除效果。

注意事項

1. Lipofectamine™ RNAiMAX試劑在冰箱4℃保存，切記不能冷凍。

2. Lipofectamine™ RNAiMAX試劑不宜在室溫放置過(guò)久，因此在制備轉染復合物前從冰箱拿出，加完后應立即放回4℃再進(jìn)行后續操作。

3.轉染復合物制備完成后室溫孵育時(shí)間不得超過(guò)20min，因此建議將細胞鋪好板后十字混勻，暫放于細胞培養箱內，再進(jìn)行轉染復合物的制備。

4.siRNA應于-80℃保存。

5.在處理細胞重懸時(shí)一定要使用無(wú)雙抗的10%FBS培養基，避免細胞死亡，如果在鋪板后還要進(jìn)行細胞傳代也沒(méi)有影響，直接用上述混懸液傳代即可。

6. Lipofectamine ™ RNAiMAX轉染的兩種方式差別不是很大，主要區別在于正向轉染需要提前一天進(jìn)行細胞鋪板，第二天直接加入轉染復合物，同時(shí)還需要在轉染后4-6h進(jìn)行細胞換液。反向轉染速度比正向轉染更快，操作較為簡(jiǎn)潔，因此更建議使用反向轉染。

以上就是本期的內容，更多資訊，歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

安培生物致力成為推動(dòng)生命科學(xué)進(jìn)步值得信賴(lài)的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實(shí)力、先進(jìn)的經(jīng)營(yíng)管理水平和完善的市場(chǎng)銷(xiāo)售體系的生物高科技企業(yè)?？偛吭O在廣東，服務(wù)面向全國。安培生物集進(jìn)口試劑、實(shí)驗室耗材銷(xiāo)售、技術(shù)服務(wù)與合約開(kāi)發(fā)為一體的專(zhuān)業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號傳導和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應線(xiàn)，在各個(gè)領(lǐng)域內向用戶(hù)提供較高的水平和質(zhì)量穩定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機構、高等院校等客戶(hù)提供各種產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。

可以在第一時(shí)間為用戶(hù)提供比較先進(jìn)的專(zhuān)業(yè)資訊和完備的產(chǎn)品和物流服務(wù)。 專(zhuān)業(yè)的技術(shù)力量使得我們能夠為廣大用戶(hù)提供強大的技術(shù)支持，深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進(jìn)的高科技產(chǎn)品推薦給國內從事生物學(xué)領(lǐng)域科研的老師和同仁。作為專(zhuān)業(yè)性的產(chǎn)品供應商，公司出資存備了大量現貨，配合優(yōu)秀的銷(xiāo)售隊伍以及專(zhuān)業(yè)的技術(shù)支持，隨時(shí)為客戶(hù)提供服務(wù)。