娇妻被交换黑人粗又大又硬_細胞周期檢測（流式細胞術(shù)）-深圳市安培生物科技有限公司

技術(shù)文章ARTICLE

您當前的位置：首頁(yè) > 技術(shù)文章 > 細胞周期檢測（流式細胞術(shù)）

細胞周期檢測（流式細胞術(shù)）

發(fā)布時(shí)間： 2022-10-18　　點(diǎn)擊次數： 1905次

原理

流式細胞周期檢測是一種常見(jiàn)的檢測細胞增殖情況的方法之一，細胞在不同周期時(shí)，其內的DNA含量不同。碘化丙啶（PI）作為一種核酸嵌入型染料，能夠進(jìn)入固定后的細胞中，與細胞內的核酸結合，其熒光強度與DNA含量成正比。通過(guò)流式細胞儀檢測不同細胞中的熒光強度，從而判定不同組別中細胞周期發(fā)生的變化。

用途

檢測不同組別或處理對某種細胞周期的改變。

材料與儀器

【器材】
流式細胞儀、移液器、槍頭、離心管、離心機、流式細胞儀、水浴鍋、流式管、濾頭；
【試劑】0.25％胰蛋白酶溶液、PBS、RNA酶、PI染液、70％乙醇溶液（建議提前放入負二十預冷）；

步驟

1.以腫瘤細胞為例，將正常生長(cháng)的對照或處理組腫瘤細胞計數，每組取2×105-3×105個(gè)細胞鋪板，待細胞貼壁后，將正常培養基替換為無(wú)血清1640培養基，同步化20 h，使得所有細胞都進(jìn)入相同的細胞周期時(shí)期；同步完后，將培養基重新替換為正常含血清培養基，繼續培養24 h；

2.用不含EDTA的胰酶將細胞消化，收集細胞，300 g，離心3 min；用吸引器去除培養基，用PBS清洗細胞一次，再次300 g，離心3 min；去除PBS，用提前預冷的70%酒精重懸細胞沉淀，4℃固定過(guò)夜；

3．4℃，1000 g，離心3-5 min，去除酒精，用PBS清洗3遍，最后一遍去除PBS；加入300 μL PBS，輕輕吹打，重懸細胞沉淀，加入相應量的Rnase至終濃度100 μg/mL，37 ℃水浴鍋中消化30 min；

4．上機前加入PI（5 mg/mL）至終濃度50 μg/mL，避光孵育15 min；孵育完后，過(guò)300目細胞篩，上機檢測；

5.分析數據。

注意事項

1. PI為致癌物質(zhì)，避免用手直接接觸。

2. 細胞數目應該達到2x104個(gè)，細胞數目過(guò)少影響實(shí)驗結果的準確性。

3.鋪板的細胞數量以收獲細胞時(shí)有足夠的生長(cháng)空間來(lái)動(dòng)態(tài)調節，現在的流式細胞儀靈敏度很高，不需要太多的細胞。

4. 在制備時(shí)，要清洗干凈酒精，特別注意清洗過(guò)程中細胞的損失。離心次數不宜過(guò)多，防止細胞丟失。

5. 可以用未處理的細胞調試流式細胞儀。

6.胰酶不加EDTA

常見(jiàn)問(wèn)題

Q:酒精固定后細胞難以沉淀下來(lái)，導致細胞丟失較多；
A:可適當延長(cháng)離心時(shí)間和轉速。

以上就是本期的內容，更多資訊，歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

安培生物科技有限公司介紹：
安培生物堅持為生命科學(xué)研究、活體動(dòng)物轉染、大規模生物生產(chǎn)、基因和細胞治療領(lǐng)域客戶(hù)，提供*細胞體內可代謝的核酸轉染試劑；inviCELL™Platelet lysate無(wú)動(dòng)物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產(chǎn)，包括培養間充質(zhì)干細胞和多種免疫細胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無(wú)血清細胞培養規模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無(wú)毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專(zhuān)注為生物醫藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細胞治療的生物科技企業(yè)

下一篇：細胞增殖分析（CCK-8 法）

上一篇：原代細胞培養

產(chǎn)品中心 Products

細胞周期檢測（流式細胞術(shù)）

原理

用途

材料與儀器

步驟

注意事項

常見(jiàn)問(wèn)題