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緩沖液梯度測序膠

發(fā)布時(shí)間： 2021-12-15　　點(diǎn)擊次數： 654次

原理

在本實(shí)驗方案，測序膠底部的緩沖液濃度大于其頂部濃度，使得短寡核苷酸片段（膠底部）的遷移率相對比長(cháng)寡核苷酸（頂部）的遷移率要慢一些，這洋凝膠可電泳更長(cháng)的時(shí)間而不至于短核苷醆從底部走失并改善了長(cháng)核苷酸鏈的分離度。

材料與儀器
DNA
TEMED SDS TBE
燒杯電泳儀
步驟

1. 按基本方案步驟1~5組裝凝膠平板夾層。

2. 在2個(gè)100 ml 燒杯中，配制緩沖液梯度凝膠溶液：50 ml 用0.5×TBE配制，25 ml 用2.5×TBE配制，在50℃以下加熱至固體*溶解，冷卻至室溫，加人20 μl TEMED和200 μl 10%SDS過(guò)硫酸氨于0.5 ×TBE / 凝膠溶液，輕輕混勻。加入10 μl TEMED及100 μl 10%過(guò)硫酸銨于2.5×TBE / 凝膠溶液中輕輕混勻。

3. 用23 ml 帶橡皮吸球的吸管，吸出12.5 ml 清亮的0.5×TBE / 凝膠溶液，接著(zhù)吸出12.5 ml 2.5×TBE / 凝膠溶液，可通過(guò)輕輕擠壓橡皮吸球以引進(jìn)3~4個(gè)氣泡。

4. 緩緩平穩地將溶液注入膠模的夾層，接著(zhù)用同一吸管，加入剩余的0.5×TBE凝膠溶液。如基本方案步驟8~10，插入梳子，安裝夾子，觀(guān)察凝膠的聚合。

5. 按基本方案步驟11~33電泳及處理凝膠。

同實(shí)驗其他方法
變性凝膠電泳實(shí)驗
1. 制作每塊凝膠時(shí)，首先要用肥皂及水小心嚴格地清洗兩塊30 cm×40 cm的前后玻璃平板，用去離子水沖洗后晾干，用噴射洗瓶噴10%乙酵或異丙醇使平板濕海。 2. 然后用Kimwi
電解質(zhì)梯度測序膠
1. 按基本方案步驟1~22灌制凝膠及進(jìn)行預電泳，但上槽緩沖液為0.5×TBE，下槽為1×TBE。 2. 按基本方案步驟23~26步準備樣品及加樣。 3.
含甲酰胺的測序膠
1. 按基本方案步驟1~5組裝凝膠平板夾層。 2. 按所需濃度配制甲酰胺凝膠溶液，加熱輕輕挽拌使之溶解，冷卻至30℃以下。 3. 加入0.15 ml TEMED
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