如何提高磷酸鈣轉染的效率？

提高磷酸鈣轉染法效率的共通步驟，目的都是為了避免產(chǎn)生會(huì )被細胞內吞、加工失效的大顆粒沉淀。

提高轉染效率的操作有以下這些：

1、將小分子DNA整合在高分子質(zhì)量基因組DNA上，以大分子作為運載體，能提高轉染效率。

2、測試緩沖液適合的ph，可制備幾批pH范圍為6.90～7.15的HEPES鹽緩沖液，分別測試緩沖效率，找到最適pH值。

3、使用轉染促進(jìn)劑，如甘油、氯喹、其他可購買(mǎi)的轉染促進(jìn)劑。因為這些試劑對細胞有一定毒性，因此，應針對每種細胞系通過(guò)實(shí)驗確定轉染促進(jìn)劑處理的最佳時(shí)機、時(shí)長(cháng)和強度。

除了這些共通的步驟，不同廠(chǎng)家還會(huì )對混勻DNA和磷酸鈣的速度有要求。有些方法要求只能輕輕攪動(dòng)，有些建議用移液器溫和吹吸混勻，有些則提倡應緩慢混合。

因此，在使用磷酸鈣轉染時(shí)，應針對不同試劑和細胞系，耐心調整實(shí)驗參數，才是獲得高轉染效率的關(guān)鍵。