細胞增殖及毒性檢測CCK試劑盒

細胞增殖及毒性檢測CCK試劑盒——CCK8

一、包裝規格

貨號：K009-100、 K009-500、K009-1000、K009-3000

規格： 100T 、 500T 、 1000T 、 3000T

儲存條件: 4℃避光保存，有效期一年。

二、產(chǎn)品說(shuō)明

Cell Counting Kit 簡(jiǎn)稱(chēng) CCK 試劑盒，為 MTT 法的替代方法，是一種基于 WST（水溶性四唑鹽，化學(xué)名：2-(2-甲 氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。

CCK 法與其它檢測方法之間的比較：

CCK 用途：藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定等

三、操作說(shuō)明

Ⅰ、制作標準曲線(xiàn)（測定細胞具體數量時(shí)）

1、先用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量，然后接種細胞。

2、按比例（例如：1/2 比例）依次用培養基等比稀釋成一個(gè)細胞濃度梯度，一般要做 3-5 個(gè)細胞濃度梯度，每組 3-6 個(gè)復孔。

3、接種后培養 2-4 小時(shí)使細胞貼壁，然后加 CCK 試劑培養一定時(shí)間后測定 OD 值，制作出一條以細胞數量為橫坐標（X 軸），OD 值為縱坐標（Y 軸）的標準曲線(xiàn)。根據此標準曲線(xiàn)可以測定出未知樣品的細胞數量（試用此標準曲 線(xiàn)的前提是實(shí)驗的條件要一致，便于確定細胞的接種數量以及加入 CCK 后的培養時(shí)間。）

Ⅱ、細胞活性檢測

1、在 96 孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）。將培養板放在培養箱中預培養（在 37℃,5% CO2 的條件下）。

2、向每孔加入 10 μL 的 CCK 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì )影響 OD 值的讀數）。

3、將培養板在培養箱內孵育 1-4 小時(shí)。

4、用酶標儀測定在 450nm 處的吸光度。

5、如果暫時(shí)不測定 OD 值，打算以后測定的話(huà)，可以向每孔中加入 10 μL 0.1M 的 HCL 溶液或者 1% w/v SDS 溶 液，并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在 24 小時(shí)內吸光度不會(huì )發(fā)生變化。

Ⅲ、細胞增值-毒性檢測

1、在 96 孔板中配置 100μL 的細胞懸液。將培養板在培養箱預培養 24 小時(shí)（在 37℃，5% CO2 的條件下）。

2、向培養板加入 10μL 不同濃度的待測物質(zhì)。

3、將培養板在培養箱孵育一段適當的時(shí)間（例如：6、12、24 或 48 小時(shí)）。

4、向每孔加入 10μL CCK 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì )影響 OD 值的讀數）。

5、將培養板在培養箱內孵育 1-4 小時(shí)。

6、用酶標儀測定在 450nm 處的吸光度。

7、如果暫時(shí)不測定 OD 值，打算以后測定的話(huà)，可以向每孔中加入 10 μL 0.1M 的 HCL 溶液或者 1% w/v SDS 溶 液，并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在 24 小時(shí)內吸光度不會(huì )發(fā)生變化。

注意：如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話(huà)，可在加 CCK 之前更換新鮮培養基（除去培養基，并用培養基洗滌細胞兩次，然后加入新的培養基），去掉藥物影響。當然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養基，直接扣除培養基中加入藥物后的空白吸收即可。

備注：

①建議先做幾個(gè)孔摸索接種細胞的數量和加入 CCK 試劑后的培養時(shí)間。

②有條件的情況下建議采用多通道移液器，可以減少平行孔減的差異。加入 CCK 試劑時(shí)， 建議斜貼著(zhù)培養板壁加，不要插到培養基頁(yè)面下加，容易產(chǎn)生氣泡，會(huì )干擾 OD 值讀數。

③白細胞可能需要培養較長(cháng)時(shí)間。

④當使用標準 96 孔板時(shí)，貼壁細胞的最小接種量至少為 1,000 個(gè)/孔 (100 μL 培養基)。檢測白細胞時(shí)的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于 2,500 個(gè)/孔 (100 μL 培養基)。如果 要使用 24 孔板或 6 孔板實(shí)驗，請先計算每孔相應的接種量，并按照每孔培養基總體積的 10% 加入 CCK 溶液。

⑤如果沒(méi)有 450nm 的濾光片，可以使用吸光度在 430-490 nm 之間的濾光片，但是 450nm 濾光片的檢測靈敏度最高。

⑥培養基中酚紅的吸光度可以在計算時(shí)，通過(guò)扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會(huì )對檢測造成影響。

活力計算： 細胞活力*（％）=[A(加藥)-A（空白）]/[A（0 加藥）-A（空白）] ×100

A（加藥）：具有細胞、CCK 溶液和藥物溶液的孔的吸光度 A（空白）：具有培養基和 CCK 溶液而沒(méi)有細胞的孔的吸光度

A（0 加藥）：具有細胞、CCK 溶液而沒(méi)有藥物溶液的孔的吸光度

*細胞活力：細胞增殖活力或細胞毒性活力 保存條件：4℃干燥避光保存，有效期一年。

僅供科學(xué)研究使用，禁止用于它用。

細胞增殖及毒性檢測CCK試劑盒系列貨號規格：

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