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發(fā)布時(shí)間： 2022-09-12 點(diǎn)擊次數： 1047次理想的免疫細胞轉染法，應該具有轉染效率高、細胞毒性小、重復性好、安全、簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。病毒介導的轉染技術(shù)，是目前轉染效率高的方法，同時(shí)具有細胞毒性很低的優(yōu)勢。但病毒轉染方法的準備程序復雜，常常對細胞類(lèi)型有很強的選擇性，在一般實(shí)驗室中很難普及。其它物理和化學(xué)介導的轉染方法則各有其特點(diǎn)。免疫細胞轉染時(shí)我們應注意的一些要點(diǎn)如下：1.如為貼壁生長(cháng)細胞，一般要求在轉染前一日，必須應用胰酶處理成單細胞懸液，重新接種于培養皿或瓶，轉染當日的細胞密度以70-90%（貼壁細胞）或2×106-4×106細胞/ml（懸浮細胞）為宜，在轉染前4h換一次新鮮培養液。2.用于轉染的質(zhì)粒DNA必須無(wú)蛋白質(zhì)，無(wú)RNA和其他化學(xué)物質(zhì)的污染，OD260/280比值應在1.8以上。3.培養基中的抗生素抗生素是影響轉染的培養基添加物。這些抗生素一般對于真核細胞無(wú)毒，但陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑增加了細胞的通透性，使抗生素可以進(jìn)入細胞。這降低了細胞的活性，導致轉染效率降低。所以，在轉染培養基中不能使用抗生素。對于穩定轉染，不要在選擇性培養基中使用青霉素和鏈霉素，因為這些抗生素是選擇性抗生素的競爭性抑制劑。另外，為了保證無(wú)血清培養基中細胞的健康生長(cháng)，使用比含血清培養基更少的抗生素量。4.設置陽(yáng)性對照和陰性對照。5.一般在轉染24-48h，靶基因即在細胞內表達。根據不同的實(shí)驗目的，24-48h后即可進(jìn)行靶基因表達的檢測實(shí)驗。6.如若建立穩定的細胞系，則可對靶細胞進(jìn)行篩選，根據不同基因載體中所含有的抗性標志選用相應的藥物，常用的真核表達基因載體的標志物有潮霉素和新霉素等。
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