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免疫細胞轉染若轉染效率不高的改進(jìn)方式

發(fā)布時(shí)間： 2022-01-01　　點(diǎn)擊次數： 1036次

　　免疫細胞轉染試劑是一種新開(kāi)發(fā)的試劑，用于將DNA和siRNA轉染到真核細胞系和各種原代細胞中。Zeta Life多肽小分子轉染試劑的尺寸大小是傳統脂質(zhì)體轉染試劑體積的1/10。本轉染試劑是通過(guò)細胞內?和細胞主動(dòng)吸收進(jìn)入細胞，進(jìn)入后對細胞膜無(wú)物理性損傷，不易出現細胞變形，保持高的細胞活力，不激活細胞表面或細胞體內marker，可反映真實(shí)的細胞通路蛋白原始數據，可轉染免疫細胞、懸浮細胞等。
　　免疫細胞轉染時(shí)應使用優(yōu)質(zhì)質(zhì)粒：
　　1.通過(guò)測量OD值來(lái)確定DNA純度和濃度，測得的OD值應介于1.7-1.9之間。脂質(zhì)體轉染基于電荷吸引原理，如果DNA不純，如帶少量的鹽離子、蛋白、代謝物污染都會(huì )顯著(zhù)影響轉染復合物的有效形成及轉染的進(jìn)行。
　　2.含有內毒素的質(zhì)粒對細胞有很大的毒性作用。轉染時(shí)，小心輕柔的將lipo2000加到培養基中并輕輕混勻，避免粗暴用力吹打，會(huì )導致脂質(zhì)體失效。
　　免疫細胞轉染后發(fā)現轉染效率不高，可以通過(guò)兩種方法改進(jìn)：
　　1.復轉染，即轉染后12-24小時(shí)再次進(jìn)行轉染，前提是該細胞對脂質(zhì)體的耐受性較好，轉染后細胞死亡數較少。
　　2.通過(guò)藥篩來(lái)殺死未轉入成功的細胞。前提是該質(zhì)粒帶有抗生素抗性的基因。

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