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                                無(wú)血清凍存液的一般凍存步驟分享

                                發(fā)布時(shí)間: 2021-11-05  點(diǎn)擊次數: 2157次
                                   無(wú)血清凍存液可即開(kāi)即用,方便省時(shí)。無(wú)血清成分,化學(xué)成分明確??焖倮鋬?,可直接置于-80℃冰箱冷凍。高復蘇活率,有效保護細胞。
                                  無(wú)血清凍存液的一般凍存步驟如下:
                                  1.選擇處于對數生長(cháng)期的細胞,在凍存前一天最好換液。將多個(gè)培養瓶中的細胞培養液去掉,用0.25%胰蛋白酶消化。適時(shí)去掉胰蛋白酶,加入少量新培養液。用吸管吸取培養液反復吹打瓶壁上的細胞,使其成為均勻分散的細胞懸液。懸浮生產(chǎn)細胞則不要消化處理。然后將細胞收集于離心管中離心(1000r/min,10分鐘)。
                                  2.去上清液,加入含20%小牛血清的*培養基,于4℃預冷15分鐘后,逐滴加入已無(wú)菌的DMSO或甘油,用吸管輕輕吹打使細胞均勻,細胞濃度為3×106-1×107/mL之間。
                                  3.將上述細胞分裝于安瓿或專(zhuān)用冷凍塑料管中,安瓿裝1-1.5mL在火焰噴燈上封口,封口處要*封閉,圓滑無(wú)勾。冷凍管要將蓋子蓋緊,并標記好細胞名稱(chēng)和凍存日期,同時(shí)作好登記(日期、細胞種類(lèi)及代次、凍存支數)。
                                  4.將裝好細胞的安瓿或凍存管裝入沙布袋內;置于液氮容器頸口處存放過(guò)夜,次日轉入液氮中。采用控制降溫速度的方法也可采用下列步驟:
                                  先將安瓿置入4℃冰箱中2-3小時(shí),再移至冰箱冷凍室內3-4小時(shí)(此步可省略),再吊入液氮容器頸氣態(tài)部分存放2小時(shí),最后沉入液氮中。
                                  細胞凍存在液氮中可以長(cháng)期保存,但為妥善起見(jiàn),凍存半年后,最好取出一只安瓿細胞復蘇培養,觀(guān)察生長(cháng)情況,然后再繼續凍存。
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