Starvio siRNA轉染實(shí)驗指南--細胞狀態(tài)

RNA轉染實(shí)驗的影響因素有很多，而細胞狀態(tài)往往是同學(xué)們最容易忽略的一點(diǎn)。如果細胞狀態(tài)差，那么轉染時(shí)就會(huì )出現細胞死亡、轉染效率低下等結果。那么關(guān)于細胞狀態(tài)，我們應該注意些什么呢？

一、使用凍存復蘇后，已傳了兩三代的細胞
剛剛復蘇的細胞十分脆弱，稍有不慎就會(huì )死亡，因此一切接觸細胞的動(dòng)作都要盡可能地輕柔。一般而言，細胞在凍存復蘇后的一兩代之內或直到它們全部復蘇之前都很難轉染。建議在傳代2-3代后再進(jìn)行實(shí)驗，此時(shí)的細胞從解凍過(guò)程中恢復過(guò)來(lái)，并恢復正常的生長(cháng)速度，狀態(tài)較為穩定。

二、細胞生長(cháng)旺盛，形態(tài)正常
1、通常情況下，細胞在快速增殖時(shí)轉染效率較高，但在停滯或死亡時(shí)轉染效率明顯下降，因而進(jìn)行小核酸轉染實(shí)驗時(shí)，細胞應該處于對數生長(cháng)期，同時(shí)細胞比活性應保持在90%以上，這樣才能獲得較好的轉染效率。
2、其次，細胞具有多種多樣的形態(tài)，我們在使用細胞時(shí)，一定要牢記它本來(lái)的形態(tài)，如球形、桿狀、星形、多角形、梭形、圓柱形等，這樣才能及時(shí)發(fā)現細胞是否已經(jīng)變異，或是培養環(huán)境條件（密度、PH、培養基、微生物污染等）是否影響細胞正常生長(cháng)。

三、注意細胞污染問(wèn)題
1、細胞污染一般是由于操作不規范或無(wú)菌措施不到位等引起的，如真菌、細菌、支原體、黑膠蟲(chóng)、病毒、細胞交叉污染等，繼而導致不同程度的細胞退化、活性下降、生長(cháng)變緩、甚至細胞死亡。
2、如果發(fā)現細胞污染，須立即停止實(shí)驗并及時(shí)處理污染源，以免造成更大的影響。切勿急功近利，使用受污染的細胞，否則會(huì )造成實(shí)驗數據的錯誤、影響實(shí)驗結果的準確性和可靠性。

以上就是針對于siRNA轉染實(shí)驗有關(guān)于細胞狀態(tài)需要注意的方面。要知道無(wú)論是什么科研，好的實(shí)驗材料才能鑄就好的實(shí)驗結果，希望大家可以重視起來(lái)，切莫因小失大！

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