細胞融合的方法及誘導物

同種細胞在培養時(shí)2個(gè)靠在一起的細胞自發(fā)合并，稱(chēng)自發(fā)融合;異種間的細胞必須經(jīng)誘導劑處理才能融合，稱(chēng)誘發(fā)融合。

仙臺病毒法融合

①兩種細胞在一起培養，加入病毒，在4℃條件下病毒附著(zhù)在細胞膜上。并使兩細胞相互凝聚;

②在37℃中，病毒與細胞膜 發(fā)生反應，細胞膜受到破環(huán)，此時(shí)需要Ca2+和Mg2+，最適PH為8.0一8.2;

②細胞膜連接部穿通，周邊連接部修復，此時(shí)需Ca2+和ATP;

④融合成巨大細胞，仍需ATP 。

聚乙二醇(PEG)法

聚乙二醇(PEG)結構為：HOH2C(CH20CH2)nCH2OH，分子 量大于200小于6000者均可用作細胞融合劑。PEG經(jīng)高壓滅菌后，與溫熱的Engle氏液混合。通常用分子 量低于1000的PEG作融合劑最好，50%PEG溶液能產(chǎn)生最多雜交細胞。PEG溶液在pH6.0時(shí)細胞融合率最高。

電融合法

在直流電脈沖的誘導下，細胞膜表面的氧化還原電位發(fā)生改變，使異種細胞粘合并發(fā)生質(zhì)膜瞬間破裂，進(jìn)而質(zhì)膜開(kāi)始連接，直到閉和成完整的膜，形成融合體。

優(yōu)點(diǎn)：融合率高、重復性強、對細胞傷害小;

裝置精巧、方法簡(jiǎn)單、可在顯微鏡下觀(guān)察或錄像觀(guān)察融合過(guò)程;

免去PEG誘導后的洗滌過(guò)程、誘導過(guò)程可控性強。

融合誘導物

細胞融合的誘導物種類(lèi)很多.常用的主要有生物法用滅活的仙臺病毒(Sendai virus)，化學(xué)法如用聚乙二醇(Polyethyleneglycol，PEG)和物理法如電脈沖。目前應用比較廣泛的是聚乙二醇，因為它易得、簡(jiǎn)便，且融合效果穩定。PEG的促融機制尚不全部清楚，它可能引起細胞膜中磷脂的酰鍵及極性基團發(fā)生結構重排。動(dòng)植物 細胞融合方法不同，生物法利用滅活仙臺病毒是動(dòng)物細胞融合所*的。

自發(fā)條件下或人工誘導下, 兩個(gè)不同基因型的細胞或原生質(zhì)體融合形成一個(gè)雜的細胞?；具^(guò)程包括細胞融合導致異核體(heterokaryon)的形成, 異核體通過(guò)細胞有絲分裂導致核的融合, 形成單核的雜的細胞。有性生殖時(shí)發(fā)生正常的細胞融合, 即由兩個(gè)配子融合成一個(gè)合子。

細胞融合不僅可用于基礎研究，而且還有重要的應用價(jià)值，在植物育種方面已經(jīng)成功的有蘿卜+甘藍、粉藍煙草+郎氏煙草、番茄+馬鈴薯等等。細胞融合另一個(gè)重要應用就是制備單克隆抗體，單克隆抗體可以用作診斷試劑，治療疾病和運載藥物，具有準確，高效，簡(jiǎn)易，快速等優(yōu)點(diǎn)。

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