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                                怎樣辨別是否細胞污染?

                                發(fā)布時(shí)間: 2022-11-01  點(diǎn)擊次數: 831次

                                培養細胞最擔心的就是細胞污染,這期繼續分享如何辨別細胞污染的經(jīng)驗。

                                 

                                 

                                ★識別支原體污染

                                這是一種很難發(fā)現卻經(jīng)常存在的問(wèn)題。

                                • 支原體是最小的(0.3 μm)能夠自我復制的有機體,倒置顯微鏡下通常觀(guān)察不到。

                                • 支原體沒(méi)有細胞壁,對常用的抗生素不敏感。支原體感染是極為不易察覺(jué)的,可能直到出現了可以觀(guān)察到的病變或發(fā)現細胞正常功能喪失的時(shí)候,才意識到是發(fā)生了支原體感染。

                                • 在沒(méi)有采用特殊的染色方法,也沒(méi)有觀(guān)察到病變的情況下,實(shí)驗總是不成功,就應懷疑被支原體污染。預防支原體污染的惟-途徑是經(jīng)常對細胞進(jìn)行篩選。

                                   

                                 

                                ★防止支原體感染

                                • 只使用那些證明沒(méi)有污染支原體的血清和培養基。

                                • 只接受那些保證沒(méi)有支原體感染的細胞。

                                 

                                注意:當你怎么樣也得不到一種細胞表面蛋白的抗體,或不能有效地表達某種蛋白質(zhì)時(shí),可能是由于使用了被支原體感染的細胞。

                                 

                                 

                                 

                                 

                                 

                                ★檢測支原體感染

                                如果這株細胞對你十分重要,那么就應該每4~6周對細胞進(jìn)行檢測,通常使用下面幾種方法:

                                ●支原體的熒光染色是簡(jiǎn)單、便宜也是常用的方法。

                                ●使用支原體的特異引物進(jìn)行PCR檢測。如果實(shí)驗室具備PCR儀和電泳條件,那么這種方法可能是尤為簡(jiǎn)單的手段??梢宰约涸O計引物(設計好恰當的對照),也可以從公司購買(mǎi)引物。

                                ●把細胞樣品送到能進(jìn)行支原體檢測的公司檢測。這樣做雖不如自己檢測快(盡管托給公司比較容易,但會(huì )很貴),只有一個(gè)好處就算是不用自己親自動(dòng)手。

                                 

                                注意:如果你發(fā)現了支原體污染

                                ●合適的方法是立即把細胞丟棄,從新復蘇。

                                ●可以不理會(huì )它。

                                ●可以采取某些挽救措施,但是會(huì )很困難,只適用于那些不可代替的細胞。簡(jiǎn)單的方法是訂購除去支原體的試劑盒。

                                 

                                 

                                 

                                ★交叉污染

                                細胞還可能被別的細胞污染,這種交叉污染可能更廣泛,許多實(shí)驗人員在不經(jīng)意之間培養、使用和凍存了其他的細胞。

                                如何避免交叉污染:

                                ●只從有保障的地方得到細胞,或者自已檢查細胞。

                                ●不要同時(shí)操作多株細胞。不要把多種培養瓶同時(shí)放在超凈臺內。

                                ●不要使用同一個(gè)移液管操作多種細胞。

                                ●不同細胞株不要使用同一瓶培養基或胰蛋白酶。

                                ●操作后不要把移液管放回培養基的瓶中。

                                ●培養維護時(shí),使用栓塞式移液管。

                                 

                                注意:

                                如果你的細胞生長(cháng)情況或功能突然發(fā)生了變化,在排除支原體污染后,檢查你的細胞是否發(fā)生了交叉污染(這些變化也可能是發(fā)生了突變或漂變)。

                                 

                                 

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