細胞污染如何識別？

在培養細胞過(guò)程中，同學(xué)們最擔心的就是細胞污染。因此，今天給大家分享如何辨別細胞污染的經(jīng)驗，趕快學(xué)起來(lái)吧~

一、肉眼觀(guān)察

把培養瓶或培養皿拿起來(lái)，對者光線(xiàn)檢查

●渾濁情況：即使細胞密度很高，培養基也應該是透明的。輕輕移動(dòng)或晃動(dòng)培養瓶，觀(guān)察培養基的渾濁或懸浮情況，一些霉菌可能會(huì )在培養基的表面形成菌落。

●培養基顏色的變化。酸性條件下，加了酚紅的培養基會(huì )由紅變黃，而堿性條件下會(huì )變成紅紫色。細菌污染常常會(huì )使培養基變成黃色，真菌污染會(huì )使培養基變成深紫紅色。

注意：丟掉細胞以前要仔細檢查一下，快速生長(cháng)和生長(cháng)過(guò)量的細胞培養基也會(huì )變黃。當培養箱中CO2的濃度變化時(shí)培養基的顏色也會(huì )變成黃色（CO2濃度太高）或是粉紅色（CO2 濃度太低）。

●聞！當然不能打開(kāi)瓶子去聞，把鼻子貼在瓶口聞，許多污染發(fā)生以后都會(huì )散發(fā)出易察覺(jué)的、特殊的氣味，甚至打開(kāi)培養箱門(mén)就聞到了。

二、顯微觀(guān)察

在倒置顯微鏡下，先用低倍（10x）再用高倍（40x）物鏡（總放大倍數為400）觀(guān)察細胞培養皿或培養瓶中的細胞：

●其他有機體：在低倍鏡下，真菌的菌絲體成長(cháng)棒狀，并橫穿整個(gè)視野，還可以觀(guān)察到酵母，有時(shí)呈小圓球形，有時(shí)還有芽。

在高倍鏡下可以觀(guān)察到細菌，它們可能是棒狀或球狀，單獨成鏈或成團存在，它們也可能和細胞混在一起，并且明顯處于細胞內部，有些細胞可能已經(jīng)裂解變得模糊。觀(guān)察時(shí)可能每?jì)蓚€(gè)視野才出現一個(gè)污染（當然也算被污染了?。?，而且可能污染物是可以運動(dòng)的。

●損傷細胞：感染會(huì )殺死細胞，可能導致每個(gè)細胞都裂解/細胞層從附著(zhù)物上全剝離，更可能的是細胞變得不規則（或大或?。?，在低倍鏡下是黑色的粒狀。

（1）懸浮細胞

懸浮培養細胞比貼壁培養細胞更加難以顯微觀(guān)察，尤其是高倍顯微鏡下。

●將培養瓶或培養皿放在顯微鏡的載物臺上，靜置一會(huì )。將焦距對準器皿的底部，觀(guān)察那些輕微附著(zhù)的細胞，因為它們可能已經(jīng)接觸到了微生物。

●對準整個(gè)培養瓶焦距， 當發(fā)現細胞的時(shí)候，用細聚焦調節旋鈕調節，仔細檢查周?chē)呐囵B基有沒(méi)有污染發(fā)生。

（2）貼壁細胞

三、制片觀(guān)察法

如果你不能確定是否發(fā)生了污染

●制作濕涂片或染色片：取1 ml培養基離心，用50μl培養基或緩沖液重新懸浮細胞，滴一滴到載玻片，蓋上蓋玻片制成濕涂片；或涂片、固定并染色（甲基蘭或革蘭氏染液），在高倍鏡下觀(guān)察。

●將細胞在營(yíng)養培養基或血瓊脂培養基上劃線(xiàn)，37℃培養3天。如果有菌落，那么細胞被污染了。

●取1 ml的細胞培養液至無(wú)菌的微量離心管中，37℃培養3天。觀(guān)察到渾濁物，做濕涂片顯微鏡觀(guān)察。

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