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含甲酰胺的測序膠

發(fā)布時(shí)間： 2021-12-15　　點(diǎn)擊次數： 722次

原理
聚丙烯酰胺凝膠加人甲酰胺可以使造成條帶壓縮的測序產(chǎn)物的二級結構不穩定。
材料與儀器
DNA
甲酰胺甲醇乙醇 TEMED SDS
電泳儀
步驟
1. 按基本方案步驟1~5組裝凝膠平板夾層。

2. 按所需濃度配制甲酰胺凝膠溶液，加熱輕輕挽拌使之溶解，冷卻至30℃以下。

3. 加入0.15 ml TEMED及1 ml 10%過(guò)硫酸銨，馬上灌膠于凝膠平板夾層，觀(guān)察聚合情況。

4. 在45~70 W 恒功率下電泳。

5. 按基本方案步驟19~33進(jìn)行干膠及處理，但步驟18在5%乙酸 / 20%甲醇固定液中固定凝膠15 min。

同實(shí)驗其他方法
變性凝膠電泳實(shí)驗
1. 制作每塊凝膠時(shí)，首先要用肥皂及水小心嚴格地清洗兩塊30 cm×40 cm的前后玻璃平板，用去離子水沖洗后晾干，用噴射洗瓶噴10%乙酵或異丙醇使平板濕海。 2. 然后用Kimwi
電解質(zhì)梯度測序膠
1. 按基本方案步驟1~22灌制凝膠及進(jìn)行預電泳，但上槽緩沖液為0.5×TBE，下槽為1×TBE。 2. 按基本方案步驟23~26步準備樣品及加樣。 3.
緩沖液梯度測序膠
1. 按基本方案步驟1~5組裝凝膠平板夾層。 2. 在2個(gè)100 ml 燒杯中，配制緩沖液梯度凝膠溶液：50 ml 用0.5×TBE配制，25 ml 用2.5×TBE配制
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