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RAW264.7細胞太容易分化，到底怎樣才能養好它？

發(fā)布時(shí)間： 2021-12-02　　點(diǎn)擊次數： 3475次

養好RAW 264.7之基礎篇

養好RAW 264.7的第一步，是要對它的基礎培養條件了如指掌，比如生長(cháng)特性、細胞形態(tài)、所需的培養基，甚至培養環(huán)境、傳代比例等等，做到知己知彼，才能百戰百勝。

細胞名稱(chēng)	RAW 264.7 (小鼠單核巨噬細胞白血病細胞)
細胞別稱(chēng)	RAW264; RAW2647; RAW 264.7; RAW-264.7; Raw 264.7; RAW 264.7
種屬	小鼠（雄性，成年BALB/c鼠）
組織來(lái)源	Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤
生長(cháng)特性	貼壁細胞
細胞形態(tài)	不規則形（圓形、短梭形）
生長(cháng)培養基	DMEM＋10% FBS＋1% P/S
培養環(huán)境	氣相：95%空氣；5%CO2 溫度：37℃
推薦傳代比例	1:3 - 1:6
凍存液配方	55% DMEM+40% FBS+5% DMSO

▲RAW 264.7生長(cháng)圖片

養好RAW 264.7之進(jìn)階篇1

除了基礎條件，其他外界因素也容易引起細胞的“小脾氣"，比如運輸路上的顛簸、傳代方法等等。針對幾種常見(jiàn)的問(wèn)題，小普來(lái)一一為大家解答。

問(wèn)題1 ：收貨后，細胞不見(jiàn)了

小普總是會(huì )收到這類(lèi)反饋：收到細胞，期待值滿(mǎn)滿(mǎn)地打開(kāi)包裝，但在顯微鏡下卻找不到細胞！

這是因為RAW 264.7 細胞貼壁較松，快遞運輸路上受到顛簸，可能會(huì )脫落。脫落的細胞懸浮在培養基中不容易聚焦。

這時(shí)候不用擔心，把細胞放進(jìn)培養箱靜置兩個(gè)小時(shí)就可以看到了。

如果靜置后看到的細胞仍偏少，請將瓶子里的培養基都轉移到離心管里，1200rpm（約250g）離心3分鐘，即可看到沉淀的細胞。

細胞全部脫落，慌亂之下可能會(huì )一個(gè)細胞都找不著(zhù)。這個(gè)時(shí)候離心驗證是較為合適的方法。

問(wèn)題2 ：收貨處理后，細胞不貼壁

將細胞離心收集，用新鮮的培養基重懸細胞放到新的培養瓶里之后，可能會(huì )出現細胞成團漂浮、不貼壁的情況。

這種情況下，把細胞離心收集，用1mL培養基重懸，慢慢地，輕輕地吹打，直到細胞被吹成單細胞，就可以重新鋪板了。

RAW 264.7脫落后傾向于抱團，抱團時(shí)細胞是活著(zhù)的，但很難貼壁。記得一定要把聚成團的細胞吹散成單細胞，不然細胞很難重新貼壁。

養好RAW 264.7之進(jìn)階篇2

正確的傳代方法是養好RAW 264.7的關(guān)鍵，每一步操作都要細致入微，稍有不慎細胞就分化了。

RAW 264.7不能用胰酶消化，許多實(shí)驗室用細胞刮傳代，這是一種非常經(jīng)典好用的方法。

小普在養RAW 264.7細胞這十幾年里，摸索出一個(gè)更不錯的方法：吹打傳代。

吹打傳代操作簡(jiǎn)單，對養細胞的萌新們更友好，也能更好地控制細胞分化率。

吹打傳代步驟

輕拍幾下培養皿

用1ml 的槍或者巴氏管把細胞吹下來(lái)（吹不下來(lái)的舍棄）

細胞吹下來(lái)后轉移到15ml離心管

1200rpm(約250g) 離心3min

去上清，用新鮮培養基重懸細胞

按比例接種到新的培養皿中

吹打傳代時(shí)機

吹打傳代時(shí)機

當細胞密度較低的時(shí)候，可能不太好吹下來(lái)。

當細胞密度達到80%~90%的時(shí)候，最容易吹下。

▲推薦傳代的密度

養好RAW 264.7之終結篇

講了那么多如何處理RAW 264.7分化的情況，那分化了的細胞到底是什么形態(tài)呢？

分化的RA264.7

分化的細胞呈多角形，體積明顯增大，時(shí)常有較長(cháng)的黑色觸角。

注意事項

RAW 264.7細胞三天不傳代更容易分化，很難吹下，每一次接種密度都要控制好；

分化的細胞貼壁牢固，傳代的時(shí)候請勿強制性吹下這些細胞，只接種容易吹下的那些未分化細胞；

吹打的力度一定要輕，切勿暴力吹打；

細胞的貼壁性和培養器皿的材料也有關(guān)，有時(shí)RAW 264.7 會(huì )出現太容易吹下的情況，連分化細胞都貼壁較松，此時(shí)更適宜用巴氏管吹打；

培養時(shí)，無(wú)法保證100% 不分化，通過(guò)傳代可以將分化比例控制在一定范圍；

RAW 264.7分裂活躍，記得每天看一看，周末也要抽點(diǎn)時(shí)間關(guān)心一下它哦~

養細胞不易，每個(gè)細胞對我們而言，都像是寶寶，含在嘴里怕化了，捧在手里怕摔了。

正是因為對科研的無(wú)畏堅持，讓我們更有力量接受考驗，因為科研本身，值得敬畏和付出。

RAW 264.7的起源

加利福尼亞索爾克研究所的W. C. Raschke在雄性BAB/14小鼠腹腔注射A-MuLV（Abelson鼠科白血病病毒）誘發(fā)腫瘤的腹水中建立了RAW 264細胞系。

他發(fā)現RAW 264可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖，并且能通過(guò)抗體依賴(lài)途徑分解綿羊紅血球與腫瘤靶細胞。

RAW 264.7不分泌A(yíng)-MuLV（但用Moloney MuLV 拯救后可以在上清檢測到病毒），對LPS非常敏感。該研究1978年發(fā)表在《CELL》雜志。

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