您的細胞養得好嗎？怎樣才能養好呢？

細胞培養是實(shí)驗室里最常見(jiàn)和最基本的實(shí)驗了。您的細胞養的好嗎？您對細胞培養體系了解嗎？培養基對細胞培養影響大嗎？……

細胞培養，蘊含著(zhù)大學(xué)問(wèn)。有時(shí)候細胞狀態(tài)不好，轉染 、藥篩這些實(shí)驗根本就沒(méi)辦法做。影響細胞培養的因素很多，讓我們先從培養基和血清說(shuō)起。

細胞培養基是人工模擬細胞在體內生長(cháng)的營(yíng)養環(huán)境，是提供細胞營(yíng)養和促進(jìn)細胞生長(cháng)增殖的物質(zhì)基礎。培養液或培養基的含義幾乎相同，英文都是medium。當它是粉劑時(shí)，傾向性地稱(chēng)為培養基，而將粉劑配成液體后，多稱(chēng)為培養液。培養液中常常補加血清、抗生素等成分。培養基主要包括天然細胞培養基、合成細胞培養基和無(wú)血清細胞培養基等。

經(jīng)典的培養基有很多種，Invitrogen (GIBCO)、Thermo Fisher(HyClone)、Sigma、Procell（普諾賽）等公司都可以提供。其中DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12都是應用*泛的培養基。其他如M199、IMDM、L15培養基等也用于某些細胞的培養。

以前經(jīng)常聽(tīng)到有人問(wèn)，這種細胞該用哪一種培養基呢?其實(shí)這個(gè)問(wèn)題的答案可以很簡(jiǎn)單。此話(huà)怎講?如果這種細胞是購自ATCC或Procell的細胞庫，那很簡(jiǎn)單，問(wèn)供應商就行了?；蛘哒业较嚓P(guān)的文獻，作為參考。

但如果你是著(zhù)手建立一種全新細胞的培養體系，根本找不到任何參考，那你就得花點(diǎn)時(shí)間自己試驗了。萬(wàn)事開(kāi)頭難嘛。因為沒(méi)有一個(gè)標準答案。在MEM中培養的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長(cháng)?？傊?，首先選MEM做貼壁細胞培養、RPMI 1640做懸浮細胞培養會(huì )是一個(gè)好的開(kāi)始。你也可以購買(mǎi)幾種培養基來(lái)，然后花大約兩周的時(shí)間做一個(gè)簡(jiǎn)單的細胞生長(cháng)實(shí)驗，來(lái)選擇其中較為適合的。有時(shí)候你會(huì )驚訝地發(fā)現你的最佳培養條件與文獻報道的不同，就算是同一種培養條件，細胞的生長(cháng)狀態(tài)也時(shí)好時(shí)壞，這是很正常的。因為試劑、水、不同批號的血清之間都存在著(zhù)差異。要提高培養基的穩定性，可以從培養基和血清兩方面入手。

以前大部分實(shí)驗室都是用干粉培養基，但配制過(guò)程就較為繁瑣，要溶解、調pH值，過(guò)濾，過(guò)程中可能會(huì )產(chǎn)生一些濃度誤差，而且有些實(shí)驗室的水質(zhì)并不理想，所以培養的效果會(huì )有差異。如果使用液體培養基，這種人為的誤差會(huì )減少，因為畢竟是大批量工業(yè)化生產(chǎn)的，批間差會(huì )很小。比干粉培養基貴不了多少，而且還幫你省了過(guò)濾器和時(shí)間。

血清含有生長(cháng)因子可促進(jìn)細胞的繁殖，含有附著(zhù)因子可促進(jìn)細胞的貼壁，同時(shí)還具有抗胰酶活性。血清同時(shí)也是礦物質(zhì)、脂類(lèi)及激素的來(lái)源。較為常用的血清有小牛血清、新生牛血清、胎牛血清和馬血清等。牛血清是按照采血時(shí)間的早晚來(lái)分類(lèi)的。采血時(shí)間越早，營(yíng)養物質(zhì)越豐富，所含抗體也越少，因而胎牛血清適合要求高的細胞系和克隆化培養。由于瘋牛病的原因，到目前為止，我國政府仍然禁止從北美洲、歐洲和日本等地區進(jìn)口牛血清，因此市面上的牛血清大多來(lái)自澳洲、南美洲，或是國產(chǎn)的。安培生物目前有代理ZETA LIFE系列澳洲、南美、法國等地來(lái)源的進(jìn)口胎牛血清。

而血清批次間的差別就是不可避免的，這種差異來(lái)源于不同的制備方法和除菌方法、動(dòng)物的年齡差別及血清的儲存條件等，而且與取血動(dòng)物的來(lái)源關(guān)系密切。不同的牧場(chǎng)、不同的氣候天氣及其他環(huán)境因素都可能影響血清的質(zhì)量。因此選好了一種血清就要盡可能長(cháng)期使用它。在需要更換時(shí)，也要盡量保持與原有的一批血清相似。