我的脂質(zhì)體轉染實(shí)驗效率低，怎么辦？

脂質(zhì)體介導轉染實(shí)驗指的是，脂質(zhì)包裹待轉染DNA形成復合體，與細胞膜融合或內吞，進(jìn)入細胞。然而，大量的脂質(zhì)體-DNA復合體，只有一小部分能運送到細胞質(zhì)并進(jìn)入細胞核中。

如何提高脂質(zhì)體介導轉染效率的關(guān)鍵，就在這一步：提高復合體進(jìn)入細胞質(zhì)的效率。

1、避免使用陰離子試劑，使用新一代聚陽(yáng)離子試劑，適用范圍廣，毒性相較以前的脂質(zhì)試劑小。

2、使用陽(yáng)離子脂質(zhì)與DNA的*佳比例，以及一定數量細胞的陽(yáng)離子脂質(zhì)用量?？上蛸徺I(mǎi)試劑的公司進(jìn)行詢(xún)問(wèn)。

這是因為過(guò)量的脂質(zhì)容易受到培養皿中其他帶電荷物質(zhì)的干擾，如細胞外基質(zhì)中的硫酸軟骨素。

3、待轉染的培養細胞應該從凍存庫中重新培養。轉染過(guò)程中，細胞在匯合狀態(tài)不應超過(guò)24小時(shí)，單層細胞應處于對數中期。

4、轉染過(guò)程中，培養基不建議加入抗生素。轉染試劑使細胞通透性增加，進(jìn)入細胞的抗生素濃度增加，會(huì )產(chǎn)生一定的細胞毒性。

5、某些血清蛋白可能會(huì )干擾脂質(zhì)體-DNA復合體形成，因此應在無(wú)血清狀態(tài)下形成復合體，后續過(guò)程可添加血清。

6、提高待轉染基因的純度，DNA的260nm：280nm應為1.8 。