6個(gè)小細節，輕松搞定細胞“劃痕實(shí)驗”

傷口愈合試驗，也通常稱(chēng)為“劃痕試驗"，是一種廣泛建立的研究體外集體細胞遷移的技術(shù)。細胞劃痕（Wound Healing)是一種操作簡(jiǎn)單，經(jīng)濟實(shí)惠的研究細胞遷移/腫瘤侵襲的體外試驗方法。其實(shí)驗原理是，當細胞長(cháng)到融合成單層狀態(tài)時(shí)，在融合的單層細胞上人為制造一個(gè)空白區域，稱(chēng)為“劃痕"。劃痕邊緣的細胞會(huì )逐漸進(jìn)入空白區域使“劃痕"愈合。

條件好的實(shí)驗室可使用活細胞成像來(lái)分析創(chuàng )傷愈合實(shí)驗中角質(zhì)形成細胞或者成纖維細胞的遷移活動(dòng)。結合包含的軟件分析算法，有可能延遲量化間隙表面關(guān)閉和關(guān)閉推移時(shí)間的速度，但是使用延時(shí)顯微鏡獲取數據的優(yōu)點(diǎn)是，可以在恒溫箱內確定和穩定的條件下記錄傷口分析。

通常，用于傷口愈合試驗的細胞類(lèi)型旨在重建表皮的再生特征。永生化的細胞系和原代細胞經(jīng)常被用作這方面的模型。較為常用的細胞類(lèi)型是角質(zhì)形成細胞和成纖維細胞。

那么制作劃痕實(shí)驗需要注意些什么呢？

1. 細胞的密度；劃痕實(shí)驗一般是幾種細胞的結合，但是每種細胞的生長(cháng)速度會(huì )不一樣，所以需要按照細胞的生長(cháng)特性調整培養時(shí)間，細胞鋪滿(mǎn)孔底時(shí)劃痕的效果會(huì )比較好，建議是100%的鋪滿(mǎn)。

2. 用槍頭畫(huà)線(xiàn)時(shí)盡量垂直，以6孔板為例 ，一個(gè)孔可以畫(huà)6條線(xiàn)

3. 畫(huà)線(xiàn)之后一定要用PBS洗兩次，以去除劃下的細胞

4. 注意培養方式一定要改成無(wú)血清或者低血清的培養基，因為：劃痕后用無(wú)血清培養基培養細胞，意在說(shuō)明在監測的 24 小時(shí)內，劃痕的縮小是細胞 遷移作用的結果，所以要將細胞增殖造成細胞遷移的影響降到最小低；但若細胞改成無(wú)血清培養后大面積漂浮，需要適量加入血清濃度不能高于2%。

5. （5）放入37℃ 5% CO2培養箱，培養。我們按0，10，12，15時(shí)間點(diǎn)取樣，拍照(具體時(shí)間依實(shí)驗需要而定)。

6. （6）統計方法：使用Image J軟件打開(kāi)圖片后，抓取自己畫(huà)的線(xiàn)條，計算細胞間距離的平均值。