凍存細胞的這些坑，你踩過(guò)嗎？

凍存細胞的錯誤時(shí)機主要有：細胞量太少，細胞狀態(tài)不好，細胞變形嚴重，或者細胞生長(cháng)堆積，一旦生長(cháng)過(guò)平頂期，培養基就會(huì )變得很黃，細胞可疑污染；鏡下觀(guān)察細胞有很多碎片或者不明物；培養時(shí)間過(guò)長(cháng)，連續培養超過(guò)二個(gè)月，細胞性狀已有改變。

選擇細胞凍存的最佳時(shí)機：細胞增殖旺盛，情況穩定，試驗效果良好，復蘇后兩周內開(kāi)始凍存一批，再往下傳的用來(lái)做實(shí)驗。

細胞太少

凍存時(shí)細胞濃度低于1- 5*10^5CELL/VIAL,復蘇很難成功,原因：細胞和細胞間會(huì )又間隙接觸反應, 解決：離心后調整細胞濃度，把細胞種更小的孔板中.

培養基很黃，凍存細胞后復蘇不長(cháng)

在細胞生長(cháng)平頂期凍存的細胞會(huì )在解凍后有幾天停滯狀態(tài)，原因：細胞在生長(cháng)平頂期已經(jīng)停止生長(cháng)，凍存后也保持互相間抑制的信號，解決辦法：用胰酶消化重新鋪板；

細胞污染或者很多小黑點(diǎn)

凍存管的蓋子一定要擰緊，否則復蘇水浴時(shí)會(huì )滲水，造成污染。復蘇細胞的時(shí)候盡量避免凍存管接縫處沾水，防止支原體污染，實(shí)驗室定期用過(guò)氧化氫熏蒸，細胞小黑點(diǎn)增多時(shí)用支原體檢測試劑盒檢測，并且及時(shí)清除，趁高溫假給細胞來(lái)次清潔吧，支原體去除試劑，*防止支原體污染好幫手。

程序降溫盒導致的細胞復蘇不活

放在－80 度的凍存盒，壁太薄，細胞在被迅速降溫，使用普通的凍存液抗氧化和抗凍添加物不夠，導致細胞內產(chǎn)生大量冰晶殺死細胞.

推薦品牌無(wú)血清細胞凍存液，凍存液含有抗氧化因子，可在細胞凍存時(shí)防止細胞產(chǎn)生氧化反應，給細胞一個(gè)好的休眠環(huán)境，含有抗凍組分，讓大部分細胞免受冰晶殺戮，好不好用一下就知道！

-80°存放太久導致的細胞復蘇不好

原因：冰箱的溫度難以恒定：開(kāi)門(mén) / 關(guān)門(mén)過(guò)于頻繁，冰箱電壓不穩等.解決辦法：盡快轉入液氮。

液氮不足

液面不能漫過(guò)所有細胞。解決：定期測量液氮儲備，保證細胞全部浸在液面下，小提醒：有幾個(gè)細胞需要氣相保存的，不能浸入液氮里，挪細胞的時(shí)候需要注意一下。

取錯細胞

找不到 / 拿錯凍存管。原因：沒(méi)有標記好細胞，沒(méi)有做好庫存記錄，解決：凍存細胞時(shí)在每支凍存管都標上細胞的名稱(chēng)，凍存時(shí)間，并記錄在冊。