細胞培養無(wú)小事，需注意的四個(gè)事項！

培養細胞的*培養基一般由基礎培養基（如MEM）和添加劑（血清或細胞生長(cháng)因子）組成，培養基的配方都會(huì )隨著(zhù)細胞需要的營(yíng)養不斷的改進(jìn) ，而抗生素也是，廣譜抗生素使用太多，會(huì )導致細胞的耐受性提高，從而產(chǎn)生抗性，甚至有些老師為了實(shí)驗的精確性，選擇不用抗生素培養細胞。

一、基礎培養基

絕大多數培養基是建立在平衡鹽溶液(BSS)基礎上，添加了氨基酸、維生素和其它與血清中濃度相似的營(yíng)養物質(zhì)，生物學(xué)最是通用的培養基是Dulbecco`s改良培養基——DMEM，同MEM含有相同的營(yíng)養成分，但濃度高出2~4倍。細胞培養選擇某種培養基，應仔細了解成分表，選擇適合細胞成長(cháng)的培養基 ，一般來(lái)說(shuō)，懸浮細胞用1640培養基比較多，而貼壁細胞用DMEM的較為常見(jiàn)。

在有些培養基中谷氨酸比其他氨基酸有更高的濃度，這是因為它具有不穩定性以及在許多細胞培養中它常用作碳源。MEM與F12均要用5%的CO2來(lái)平衡，DMEM含更高濃度的NaCO3，培養敏感的神經(jīng)細胞時(shí)要用10%的CO2來(lái)平衡，當然也可以在較低CO2濃度下使用。這些基礎培養基的組成成分是建立在對不同細胞系生長(cháng)的研究之上的，但通常在原代培養中使用也能有比較令人滿(mǎn)意的結果。

原則上，HEPES作為緩沖劑可用來(lái)代替碳酸氫鹽，以解除需要高濃度CO2培養環(huán)境的限制。實(shí)際操作中并非如此簡(jiǎn)單。顯然，溶解的CO2與碳酸氫鹽對良好的細胞生長(cháng)是重要的。Leiboviz`s L15培養基采用了與眾不同的BSS作基礎，它含有高濃度的氨基酸來(lái)提高緩沖能力，培養基中使用半乳糖作碳源，以阻止培養基中乳酸形成，少量溶解的CO2由丙酮酸代謝產(chǎn)生。所以使用L-15培養基培養的細胞一般都需要密封培養瓶，或者使用100%的空氣培養。

二、血清

細胞在單純的基礎培養基中不能存活，在特殊類(lèi)型的細胞培養中必須提供某些有營(yíng)養物質(zhì)及生長(cháng)因子才能使細胞得以生長(cháng)并維持生長(cháng)狀態(tài)?；A培養基常常要添加血清，血清終濃度多為5~20%。特殊用途的血清來(lái)源須用經(jīng)驗確定，廣泛應用的血清種類(lèi)有馬血清與胎牛血清。胎牛血清中富含有絲分裂因子，常選其作增殖細胞用的血清，也用于細胞系和原代培養。而馬血清常常用來(lái)作有絲分裂后的神經(jīng)元培養。

血清的不同批號含有不同的成分，應該在使用前對血清進(jìn)行測試。大多數試劑商提供樣品，所滿(mǎn)意的批號即可選用，這樣可以一次得到足夠一年用量的血清，

三、抗生素

在細胞培養中較為常用的抗生素是青霉素（常用濃度是25~100ui/ml）與鏈霉素（25~100μg/ml）。這兩種抗生素?；旌鲜褂?。在一些實(shí)驗室里，它們常規加入所有的培養基中。慶大霉素（10~100μg/ml）通常有廣譜抗菌效應，并具有溶液穩定性，一般實(shí)驗室經(jīng)常使用。

四、培養的保持

培養物是應該保持在孵箱中的。孵箱可以自動(dòng)將O2與CO2混合很快達到培養基的設計要求，空氣中的氧濃度比血液和腦脊液中要高得多，高濕度可避免培養皿中培養基的蒸發(fā)，保持孵箱中的濕度通常是在箱底部放上一大盆水，這水應該經(jīng)常換，乘水容器應經(jīng)常消毒以防霉菌生長(cháng)。若孵箱曾被霉菌孢子嚴重污染過(guò)，那么要想*去除污染則會(huì )非常困難。當培養物必須要長(cháng)期保持在孵箱中時(shí)，應采用較少培養基的瓶、皿，且將蓋子蓋緊以避免蒸發(fā)，或采用相應的按比例供空氣的孵箱。

溫度的精確調節應定期檢查，孵箱溫度常設置為37℃或較低溫度。細胞在低溫時(shí)可有較長(cháng)時(shí)間的忍耐限度，但當溫度升至39℃時(shí)，幾小時(shí)內即死亡。