RAW264.7細胞轉染質(zhì)粒DNA、siRNA在發(fā)表文章中的經(jīng)驗分享

石河子大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，在2021年發(fā)表文章到Frontiers in Immunology的學(xué)術(shù)期刊中科研者使用美國zeta life轉染試劑，高效率轉染質(zhì)粒DNA和siRNA到RAW264.7細胞，具體轉染RAW264.7細胞方法經(jīng)驗如下：（注意：本文轉染實(shí)驗中使用的細胞數量、試劑用量和操作方法不適用于傳統lipo3000轉染試劑或類(lèi)似產(chǎn)品）

All plasmids and siRNAs (20 uM/uL) were transfected using the Advanced DNA  RNA Transfection Reagent™ (ZETA LIFE，USA) according to the manufacturer’s  protocol. Briefly,RAW264.7 cells were planted on the cell culture plate one day in advance, the  cell confluence degree was up to 60 – 80 % at the time of transfection, plasmid or siRNA was directly mixed with transfection reagent according to 1:1 relationship,  then mixed by blowing into a pipette for 10 – 15 times. Following incubation at room  temperature for 10-15 minutes, the complex was added to the cell culture plates, mix 148 gently, and incubated in the CO2 incubator for 24h. All the siRNAs were designed by  Gene Pharma  transfection efficiency was measured using 150 qRT-PCR. 

Zeta Life介紹：

美國 Zeta Life 公司成立于 1989 年，是國際無(wú)血清細胞培養基 DMEM/F12 主要完成人，有三十多年的胎牛血清、無(wú)血清細胞培養基、以及干細胞、免疫細胞及腫瘤細胞等多種不同類(lèi)型哺乳動(dòng)物細胞的無(wú)血清培養液生產(chǎn)經(jīng)驗；也是目前胎牛血清、無(wú)血清培養基最大的 OEM 供應商之一；每批血清均有完整的血源證明文件、獸醫師檢驗證明及品質(zhì)測試報告；ZETA LIFE 血清在 100 級的無(wú)菌間采用全自動(dòng)方式制造生產(chǎn)，具有良好的可再現性及可追溯性。  2018 年 Zeta Life 公司與美國加利福尼亞大學(xué)舊金山校區聯(lián)合開(kāi)發(fā)用于哺乳動(dòng)物細胞、活體動(dòng)物轉染的 Advanced DNA RNA 第三代多肽小分子轉染試劑，此技術(shù)成為新的蛋白功能、免疫細胞及干細胞治療、研發(fā)及生產(chǎn)的主要關(guān)鍵技術(shù)之一。