小鼠單核巨噬細胞白血病細胞（RAW264.7）的培養要點(diǎn)及高效轉染試劑

  小鼠單核巨噬細胞白血病細胞（RAW264.7）是通過(guò)Abelson鼠白血病病毒誘導BALB/c小鼠產(chǎn)生腫瘤后得到的細胞株。其在醫學(xué)研究中應用十分普遍，是許多白血病相關(guān)研究模型的常用細胞株，在微生物學(xué)、免疫學(xué)等研究中也十分常用。但RAW264.7細胞形態(tài)和分化狀態(tài)多變，在實(shí)際培養中較難把握，給科研工作帶來(lái)了一定困難；且RAW264.7細胞很難轉染，許多研究者表示Lipofectamine 2000根本轉不進(jìn)去，或者僅有不到10%的轉染效率。因此RAW264.7細胞的培養及轉染方法就很值得去探討，本文就這些方面進(jìn)行介紹，以供科研工作者借鑒。

一、RAW264.7細胞的形態(tài)特征

       很多人養RAW264.7細胞時(shí)發(fā)現自己的細胞出現偽足；就連ATCC的描述也稱(chēng)RAW264.7細胞形態(tài)多樣，可有圓形、類(lèi)圓形，以及長(cháng)出偽足的長(cháng)梭形、多邊形，可單核可多核。而實(shí)際，有偽足的情況是RAW264.7細胞受到外界刺激進(jìn)行了分化，是細胞衰老、分化的表現；RAW264.7細胞的“最佳"形態(tài)應是較小的單核圓形細胞。

二、RAW264.7細胞的培養條件

       RAW264.7細胞的培養環(huán)境與一般貼壁細胞并無(wú)差異。即培養箱溫度為37℃，CO2濃度為5%。ATCC推薦的培養基為DMEM+10%的胎牛血清；實(shí)際上，經(jīng)研究者們實(shí)驗發(fā)現高糖型DMEM培養的RAW264.7細胞傳代后貼壁更快、細胞生長(cháng)速度更快。因此，推薦使用高糖型DMEM，FBS濃度為10%，作為RAW264.7細胞的培養基。

三、RAW264.7細胞的傳代

       關(guān)于RAW264.7細胞的傳代方法，ATCC推薦使用細胞刮刀。也可采用0.25%的胰酶消化或采用彎嘴吸管吹打等方法。采用細胞刮刀進(jìn)行傳代時(shí)，細胞能最大限度被收集起來(lái)，但會(huì )對細胞造成機械性損傷、影響細胞形態(tài)及貼壁時(shí)間等。采用胰酶消化時(shí)，由于RAW264.7細胞貼壁較牢，消化時(shí)間就較長(cháng)。但消化時(shí)間點(diǎn)不易把握，易消化過(guò)度，對細胞生長(cháng)造成抑制。

       因此，推薦使用彎嘴吸管吹打進(jìn)行傳代。具體做法是，當細胞達到傳代密度時(shí)，先棄去培養基，用預冷的PBS洗滌兩次，用彎嘴吸管吸取培養基，均勻、稍用力吹打瓶底，即可將細胞吹打下來(lái)（吹不下來(lái)的就不要了），離心后重懸即可分瓶培養。2 h后可見(jiàn)細胞貼壁。

由于RAW264.7細胞生長(cháng)速度較快，一般1-2d換液1次，密度長(cháng)至60%-70%左右即可傳代，傳代比例可為1:3-1:6。若傳代間隔太久，細胞生長(cháng)密度過(guò)大，細胞也容易發(fā)生分化，出現長(cháng)偽足的多形細胞。

四、RAW264.7細胞的凍存及復蘇

       RAW264.7細胞的凍存及復蘇方法與一般貼壁細胞并無(wú)較大差別。但由于RAW264.7細胞對外界刺激較敏感，對營(yíng)養條件要求較高，許多人建議降低DMSO的濃度，增加FBS血清的濃度。因此凍存液的推薦配方為5% DMSO和20% FBS的培養基（小鼠單核巨噬細胞白血病細胞的培養及其在誘導破骨細胞中的應用，許丹等，中國骨質(zhì)疏松雜志，2016, 10, 22, 10）。

五、RAW264.7細胞的轉染

（一）以往轉染數據

      RAW264.7細胞是一種巨噬細胞，有很強的貼壁性和偽足產(chǎn)生性，其轉染較難，一般采用電轉或慢病毒穩轉的方法。有研究者對RAW264.7細胞用幾種不同的轉染方法進(jìn)行處理，對轉染效率進(jìn)行比較。結果發(fā)現，脂質(zhì)體轉染（Lipofectamine 2000, Invitrogen）效率很低，僅為12.17±1.53%，慢病毒轉染效率是最高，可達34.75 ± 5.30%，羅氏轉染（X-treme GENE HP DNA Transfection Reagent, Roche）和電穿孔轉染效率分別為16.52 ± 3.86%和15.73 ± 3.29%（巨噬細胞RAW264.7不同轉染方法的比較，李亞等，生物技術(shù)，2014, 24, 2）。

（二）最新高效轉染試劑

       既然RAW264.7細胞這么難轉染，實(shí)驗還得繼續，那怎么辦呢？

       目前ZETA LIFE新推出一款Advanced系列高效DNA、RNA轉染試劑。其廣泛適用于貼壁細胞和懸浮細胞的轉染，可轉DNA、RNA，也可共轉染，還可進(jìn)行小動(dòng)物活體轉染。

這一款轉染試劑有以下幾個(gè)特點(diǎn)：

       1.適用細胞廣

       廣泛用于293T，9L，A172, A375, A549, COS7, CHO-K1, C6S, C2C12, NIH3T3, RG2, T98G, U87, U118, MDCK, MCF-7, HT1080, HEK, H4, RAW264.7等多種細胞系。

      2.細胞毒性低

      其最高細胞存活率可高達98%，平均細胞存活率可達80%。

       3.轉染效率高

       其最高轉染效率可高達96%，平均轉染效率可達70%。

（三）Advanced系列高效DNA、RNA轉染試劑轉染質(zhì)粒進(jìn)RAW264.7的實(shí)例（來(lái)自實(shí)驗者的實(shí)際數據）

由上圖可明顯看出Advanced系列高效DNA、RNA轉染試劑對RAW264.7轉質(zhì)粒的轉染效率高達95%以上，且細胞存活率較高。

       相信Advanced系列高效DNA、RNA轉染試劑 將是您對的選擇，希望能為您的研究助力。

Zeta Life高效Advanced DNA RNA轉染試劑系列：                     

品牌：美國Zeta Life  貨號：AD600025  （Zeta Life原代細胞轉染試劑）0.25ml/1590元

品牌：美國Zeta Life  貨號：AD600050  （Zeta Life真核細胞轉染試劑）0.5ml/2390元

品牌：美國Zeta Life  貨號：AD600075  （Zeta Life可代謝轉染試劑）0.75ml/2890元

品牌：美國Zeta Life  貨號：AD600150  （Zeta Life免疫細胞轉染試劑）1.5ml/4490元

品牌：美國Zeta Life  貨號：AD600500  （Zeta Life懸浮細胞轉染試劑）5ml/14580元

品牌：美國Zeta Life  貨號：AD601000  （Zeta LifeRAW264.7細胞轉染試劑）10ml/27480元

深圳市安培生物科技有限公司推出各類(lèi)進(jìn)口胎牛血清和高效細胞轉染試劑，均經(jīng)過(guò)反復充分驗證，培養細胞和細胞轉染效果好且重復性佳。尊敬的客戶(hù)您如在訂購過(guò)程中遇到任何問(wèn)題都可以與我司在線(xiàn)客服聯(lián)系尋求幫助，新客戶(hù)也可聯(lián)系在線(xiàn)客服申請試用裝。