貼壁細胞和懸浮細胞如何傳代？

1.貼壁細胞如何進(jìn)行傳代？

去掉原T25培養瓶里面的培養基，T25瓶加3-4 ml PBS洗1-2次;棄PBS，再加1.5 ml的Trypsin-EDTA (1X)消化液消化細胞，顯微鏡下觀(guān)察，待細胞變圓，細胞間隙明顯，部分細胞剛開(kāi)始脫離瓶壁，加4 ml左右（血清）細胞培養液混勻終止消化，將細胞小心吹打下來(lái)，1000 rpm/min室溫離心5min;棄上清，細胞沉淀用（血清）細胞培養液重懸，按要求分瓶(視細胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8)，每T25瓶補足培養基至5-6 ml，37℃、5%CO2孵箱培養。

2.懸浮性細胞應如何傳代處理？

一般僅需持續加入新鮮培養基于原培養角瓶中，稀釋細胞濃度即可，若培養液太多時(shí)，將細胞懸液移入離心管中，1000 rpm/min 室溫離心5 min。棄上清，細胞沉淀用（血清）細胞培養液重懸，按要求分瓶(視細胞密度而定1:4-1:8)，每T25瓶加培養液至4-5 ml，37℃、5%CO2孵箱培養。有些懸浮細胞趨于成團生長(cháng)，此時(shí)細胞生長(cháng)狀態(tài)良好，當補液時(shí)，需避免反復吹打。