銷(xiāo)售熱線(xiàn)
                              
                19126518388
            
                              
        
                              
      
                              
      
                              
      
             
         
    
         
         

  
  
  
                              
    
                              
	  
                              
        
        
                              
 
                              
     
   
 
                               
         
                              
	   
                              
    
                              
  
                              
      

                              
  
                              
    
                                
      
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                                DNA 復制需要哪些元素
                                
                
                                
                  發(fā)布時(shí)間： 2023-06-28　　點(diǎn)擊次數： 737次  
                
                                
                
                                
                 
                                1) 需要脫氧核苷三磷酸：
                                進(jìn)行 DNA 合成必須具備的 2 個(gè)關(guān)鍵底物之一，即 4 種脫氧核苷三磷酸——dGTP、dCTP、dATP、dTTP。通常商品化 PCR 酶會(huì )提供這 4 種脫氧核苷三磷酸的混合物 dNTP。 
                                2) 需要引物-模板接頭：
                                DNA 合成的第二個(gè)重要底物是一具有特定序列的雙鏈 DNA，稱(chēng)為引物-模板接頭，即指 導互補脫氧核苷酸添加的單鏈 DNA 模板和與模板互補但比模板短的一小段序列。
                                較長(cháng)的 DNA 鏈有一個(gè)與引物退火的區域和一個(gè)毗鄰的單鏈 DNA 區，此區作為 DNA 合成的模板；較短的引物與較長(cháng)的 DNA 鏈退火，且必須有與模板單鏈 DNA 區毗鄰的游離 的 3’-OH，當新核苷酸加入時(shí)引物的 3’-OH 端得以延伸。一般而言，引物-模板接頭的引物部分才是 DNA 合成的底物，而模板僅僅提供選擇哪種核苷酸進(jìn)行添加的必要信息。
                                因此我們在設置 PCR 反應程序時(shí)第一步是高溫變性（一般會(huì )設置成 95℃變性），就是為了把雙鏈的模板變性成單鏈，第二步是降低溫度，是為了讓引物能互補匹配到單鏈模板上。

                                3) 需要 DNA 聚合酶：
                                DNA 聚合酶的三維結構類(lèi)似于一只右手。手掌域是催化活性位點(diǎn)，可以催化任意 4 種脫氧核苷三磷酸的添加，這一區域結合 2 個(gè)二價(jià)金屬離子（通常是 Mg2+或 Zn2+）。其中一個(gè) 金屬離子降低 3’-OH 對其氫的親和力，這會(huì )產(chǎn)生一個(gè)準備對引入 dNTP 上的 α-磷酸進(jìn)行親核 攻擊的 3’O-。第二個(gè)金屬離子與 dNTP 的 β-和 γ-磷酸負電荷協(xié)同作用，穩定由引物和引入核苷酸連接在一起時(shí)所產(chǎn)生的焦磷酸。所以我們在 PCR 時(shí)，反應體系里加入適量的 Mg2+是十分重要的，添加的量少導致 PCR 酶無(wú)法發(fā)揮最大活性，添加太多則降低酶反應的特異性。
                                 
                                DNA 聚合酶是一種延伸酶，其催化是快速的。DNA 合成的速度主要取決于 DNA 聚合酶 的延伸能力。在實(shí)際應用中，一般的Taq酶的延伸速度大致是擴增產(chǎn)物在2kb以?xún)仁?kb/min。 擴增產(chǎn)物超過(guò)2kb 的部分可以以500bp/min 來(lái)計算。比如擴增2kb，延伸時(shí)間就設置成2min， 而擴增 3kb，就可以把延伸時(shí)間設置成 4min。也有延伸能力更強的酶，那么延伸時(shí)間就按產(chǎn) 品說(shuō)明書(shū)描述的來(lái)設置。

                                深圳安培生物科技有限公司，是一家具有核心的技術(shù)實(shí)力、壹流的經(jīng)營(yíng)管理水平和完善的市場(chǎng)銷(xiāo)售體系的生物高科技企業(yè)?？偛吭O在廣東，服務(wù)面向全國。安培生物集進(jìn)口試劑、實(shí)驗室耗材銷(xiāo)售、技術(shù)服務(wù)與合約開(kāi)發(fā)為一體的專(zhuān)業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供壹流的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號傳導和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應線(xiàn)，在各個(gè)領(lǐng)域內向用戶(hù)提供世界前沿水平和質(zhì)量穩定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機構、高等院校等優(yōu)質(zhì)客戶(hù)提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。

                                
                
                                
                
            
                                
        
                                
     
                                
     
                                
   
                                
 
                                
 
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