PCR 產(chǎn)物純化

一、材料

1. 緩沖液和溶液

TE(lOmmol/L Tris-HCl，lmmol/L EDTA，pH7.5) 或去離子水

2. 核酸和寡核苷酸

待測序的 PCR 產(chǎn)物

3. 離心機和轉子

帶有固定傾角轉子的小型離心機，如 Eppemlorf5415C

4. 特殊設備

AmiconMicrocon-PCR 濾件（Millipore) 或者相當的產(chǎn)品，微董離心管或接收管

二、方法

1. 對每一個(gè)待純化的 PCR 產(chǎn)物，都在接收管中放置一個(gè)濾件，濾件的儲液面向上

儲液池中加入 400ul 去離子水或 TE，注意加樣時(shí)不要觸及膜。加入 100ulPCR 產(chǎn)物，避免帶進(jìn)礦物油。如果 PCR 產(chǎn)物不足 100ul, 用去離子水或 TE 補足，蓋上蓋子。

2. 將 1 中所得組合體用帶有固定傾角轉子的離心機，l000 g 離心 15 min(例如，Eppendorf5415C 離心機上 3300r/min)。注意蓋子和管的結合部朝向轉子的中央。

3. 移去濾件，將其放入一干凈的收集管中，有膜面朝上（如果愿意，濾件可以一直

存到樣品分析結束）。在濾件上小心地加 20ul 去離子水或 TE，注意不要觸及膜，然后將濾件反轉過(guò)來(lái)，放回到干凈的收集管中，使帶有液體的一面朝下。

4.1000 g 離心 2 min, 收集純化的片段。