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兔多克隆抗血清的制備

發(fā)布時(shí)間： 2023-04-12　　點(diǎn)擊次數： 718次

材料與儀器
抗原
PBS 乙醇
注射針頭注射器培養箱
步驟
1. 取2 ml 的弗氏完-全佐劑加到2 ml 的溶于PBS的純化抗原中，使之乳化。用3 ml 注射器抽取此乳化液，接上22G注射針頭，排出注射器中的氣泡。
2. 將兔子敢在固定架上，用一只手抓住兔的頸背部毛皮，另一只手托住兔的后腿及臀部，將兔束緊固定以使后肢不能伸張，用70%乙醇對所要注射的區域進(jìn)行清潔消毒，在后肢大腿肌肉內進(jìn)針約1 cm 深，毎條大腿肌肉內最多注射0.5 ml 乳化液。
3. 四周后，用1 mg 的混溶干弗氏不完-全佐劑的抗原乳化液（1：1）對兔進(jìn)行肌肉內加強免疫注射，操作步驟同1和2，初次加強免疫后2周再次進(jìn)行加強免疫注射。

4. 第二次加強免疫注射10天后，從兔的耳緣靜脈處放血。

（1）先將兔固定在固定架上（固定緊），使其耳朵伸出，用70%乙醇洗潔消毒一側耳朵。

（2）將兔耳置于熱燈之下，用手指輕輕地拍打兔耳；1~2 min 內兔耳上的血管即會(huì )充分地充盈。

（3）用一消毒過(guò)的解剖刀的鋒尖在兔耳緣靜脈上迅速劃一長(cháng)約0.5 cm 的小口，收集兔血于50 ml 的塑料離心管中，直至傷口不再流血為止。

（4）使兔血順管壁下落，以避免發(fā)生溶血。
5. 將兔耳擦拭干凈，涂以70%乙醇，在耳朵傷口上涂一層凡士林，以減輕由乙醇產(chǎn)生的皮膚刺激感。
6. 將兔血在室溫下靜置數小時(shí)后置4 ℃過(guò)夜，用一木質(zhì)的撥棒將血凝塊輕輕地挑松并使之由離心管的側壁脫落，將血洧移到合適的離心管中，5 000 g 離心10 min，去除殘留的紅細胞及其他碎片。
7. 每?jì)尚瞧谶M(jìn)行進(jìn)一步的加強免疫。每次加強免疫后10天，可采集一次兔血，兔的兩只耳朵可輪流交替進(jìn)行采血。

8. 采用ELISA法或RIA法對血清中的特異性抗體進(jìn)行滴度測定。如果需要的話(huà)。

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