大鼠胰腺移植模型制作

一、供、受者大鼠的選擇

根據不同的研究目的選擇不同的動(dòng)物品系，在同種移植模型中，一般采用兩種純系健康大鼠，如Lewis大鼠，Brown Norway 大鼠（BN），DA大鼠等，國內應用Wistar，SD大鼠也比較多。其中受者大鼠于移植手術(shù)前制備成糖尿病模型。

二、大鼠糖尿病模型的建立

1. 方法一：10%的四氧嘧啶按100mg/kg的劑量連續兩天于大鼠腹股溝區皮下注射，隔日測定血糖，一周后血糖持續>16.7mmol/L者，作為合格的糖尿病受者大鼠。

2. 方法二：采用70mg/kg肌肉注射鏈脲霉素，以尿糖定性強陽(yáng)性，非禁食血糖>20mmol/L持續10天者為穩定的糖尿病模型。

3. 方法三：受者鼠一次性靜脈注射鏈脲霉素55mg/kg，第7d開(kāi)始測定非禁食血糖，若血糖濃度連續3d超過(guò)22mmol/L，判定為大鼠糖尿病誘導成功。

三、術(shù)前準備及麻醉方式

術(shù)前供者禁食24h，飲用50g/L葡萄糖生理鹽水，受者禁食24h，飲用25g/L葡萄糖生理鹽水，供、受者麻醉均采用1%的戊吧比妥鈉40mg/kg腹腔注射，麻醉過(guò)淺時(shí)加乙-醚吸入輔助。

四、供胰切取術(shù)

1. 麻醉成功后，經(jīng)腹正中切口進(jìn)腹。

2. 將胃向上翻起，結扎切斷胰腺和大網(wǎng)膜之間的血管聯(lián)系及胃網(wǎng)膜左右動(dòng)靜脈，結扎十二指腸近端，切斷幽門(mén)，在食管與胃交界出結扎切斷胃左血管、食管，結扎切斷胃短動(dòng)脈并切除全胃。

3. 胰腺下緣自脾臟向胰頭方向游離胰腺，保留胰管入十二指腸管約1.5cm，結扎切斷腸系膜上血管。

4. 結扎切斷膽總管及肝固有動(dòng)脈，游離門(mén)靜脈至入肝門(mén)分叉處。

5.打開(kāi)腹主動(dòng)脈前被覆的后腹膜，結扎切斷左右腎及腎上腺動(dòng)脈，全部游離腹腔動(dòng)脈和腸系膜上動(dòng)脈所在的腹主動(dòng)脈段，經(jīng)陰莖背靜脈注入肝素（25U/L）生理鹽水。

6. 分別結扎腸系膜上動(dòng)脈開(kāi)口以下和腹腔動(dòng)脈開(kāi)口以上的腹主動(dòng)脈，腸系膜上動(dòng)脈開(kāi)口以下腹主動(dòng)脈插管，予以4℃ Euro Collins液（或者4℃平衡液25U/L肝素溶液）灌洗移植物，同時(shí)橫斷門(mén)靜脈，灌洗至門(mén)靜脈斷端流出液轉清，移植物顏色由淡紅變?yōu)樯n白。

7. 灌洗完成后，完整地切取移植物及脾臟，移植物置4℃Euro Collins液中保存。

五、供胰植入術(shù)

1. 腔靜脈-膀胱引流式胰腺移植

（1）下腹正中切口進(jìn)腹，用生理鹽水紗布將腸管推向上方，膀胱、精囊腺推向下方并以拉鉤固定，游離髂血管分叉上方1.5cm左右的腹主動(dòng)脈及下腔靜脈，經(jīng)陰莖背靜脈注射肝素（25IU/L）至全身肝素化。

（2）血管夾阻斷游離血管上下端，9-0無(wú)創(chuàng )顯微縫線(xiàn)作供者門(mén)靜脈與受者下腔靜脈連續端-側吻合，8-0無(wú)創(chuàng )顯微縫線(xiàn)作供者腹主動(dòng)脈與受者腹主動(dòng)脈連續端-側吻合。吻合過(guò)程中移動(dòng)胰腺時(shí)，牽動(dòng)與移植胰腺相連脾臟，避免直接鉗夾移植胰。吻合口及供者腹主動(dòng)脈表面可以涂少量的ZT膠，以封閉吻合口縫隙和腹主動(dòng)脈營(yíng)養血管，切除移植物附帶的脾臟，先遠心端再近心端松開(kāi)血管夾，恢復移植胰血供。

（3）將供者十二指腸段與受者膀胱頂部行側-側吻合（3-0絲線(xiàn)單層連續縫合），吻合口大約0.5cm，大網(wǎng)膜覆蓋移植物，關(guān)腹結束手術(shù)。

2. 門(mén)靜脈-腸道引流式胰腺移植

（1）腹正中切口入腹，打開(kāi)腹腔，在左腎靜脈以下，分離出腹主動(dòng)脈，用改良過(guò)的李氏鉗縱行夾住該段動(dòng)脈，縱行切開(kāi)動(dòng)脈閉，用含肝素的平衡鹽溶液沖洗管腔，在低位分離腸系膜上靜脈，近端用微血管夾夾住，遠端用3-0絲線(xiàn)結扎，在同一水平高度同時(shí)結扎腸系膜上動(dòng)脈。

（2）緊靠絲線(xiàn)結扎處切斷腸系膜上靜脈，管腔同樣用含肝素的平衡鹽溶液沖洗，切斷缺血的小腸及回盲部（30——40%），用7-0尼龍線(xiàn)將兩斷端行端-端全層腸吻合，將移植物從冰水中移出，用帶冰屑的濕紗布覆蓋移植物。

（3）先行靜脈縫合，應確保靜脈吻合后無(wú)扭轉，供者門(mén)靜脈與受者腸系膜上靜脈以10-0無(wú)損傷顯微縫線(xiàn)端-端間斷縫合，在縫合過(guò)程中，用生理鹽水灌洗靜脈腔，并輕輕地用顯微鉗分離血管邊緣，避免吻合口狹窄。供胰腺的腹主動(dòng)脈與受者的腹主動(dòng)脈以9-0無(wú)損傷顯微縫合線(xiàn)行端-側連續縫合。

（4）吻合完畢后先松開(kāi)靜脈夾，再松開(kāi)動(dòng)脈夾，用干明膠海綿輕壓動(dòng)脈吻合口1——2min。

（5）最后，供胰的十二指腸開(kāi)口一端與受者近端空腸行端-側吻合，另一端結扎。切除供胰上附著(zhù)的脾臟，關(guān)腹結束手術(shù)。

六、術(shù)后監測和處理

根據實(shí)驗研究設計的需要監測移植胰功能，如果移植胰功能正常，在發(fā)生排斥反應以前空腹血糖值正常，C-肽值正常。