細胞培養遇到問(wèn)題？怎么解決？

(1)CO2張力不對。
(2)培養瓶蓋擰得太緊。
(3)NaHCO3緩沖系統緩沖力不足。
(4)培養液中鹽濃度不正確。
(5)細菌、酵母或真菌污染。

(1)按培養液中NaHCO3濃度增加或減少培養箱內CO2濃度，2.0g/L到3.7g/L濃度NaHCO3對應CO2濃度為5%到10%。
(2)松開(kāi)瓶蓋1/4圈。
(3)改用不依賴(lài)CO2培養液。加HEPES緩沖液至10到25mM終濃度。
(4)在CO2培養環(huán)境中改用基于Earle′s鹽配制的培養液，在大氣培養環(huán)境中培養改用Hanks鹽配制的培養液。
(5)丟棄培養物，或用抗生素除菌。

可能原因：

建議解決方法：

(1)細菌或真菌污染。

(1)丟棄培養物，或用抗生素除菌。

(1)胰蛋白酶消化過(guò)度。
(2)支原體污染。
(3)培養瓶瓶底不干凈。

(4)培養液pH值過(guò)堿(NaHCO3分解)。

(5)消化液或培養液配制錯誤、過(guò)期儲存、儲存不當。
(6)細胞老化(如傳代前細胞已匯合導致失去貼附性)。
(7)接種細胞起始濃度太低或太高。

(1)縮短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低胰蛋白酶濃度。
(2)分離培養物，檢測支原體。清潔支架和培養箱。如發(fā)現支原體污染，丟棄培養物。
(3)注意刷洗，或換用一次性塑料培養瓶。
(4)使用無(wú)菌醋酸溶液調整pH值或充入無(wú)菌CO2(將培養液敞口放入培養箱也可)。
(5)重新配置消化液或培養液。
(6)啟用新的保種細胞。
(7)調節最佳接種細胞濃度。

(1)培養液中含鈣、鎂離子。
(2)支原體污染。
(3)蛋白酶過(guò)度消化使得細胞裂解釋。
(4)DNA污染。

(1)用無(wú)鈣鎂平衡鹽氵容液洗滌細胞，輕輕吹吸細胞獲得單細胞懸液。
(2)分離培養物，檢測支原體。如發(fā)現支原體污染，丟棄培養物。
(3)用DNase I處理細胞。 

(1)原代培養組織在進(jìn)入培養前已污染。

(1)培養前用含高濃度抗生素的平衡鹽溶液反復沖洗組織。

(1)由于更換不同培養液或血清。

(2)培養液中一些細胞生長(cháng)必需成分如谷氨酰胺或生長(cháng)因子耗盡或缺乏或已被破壞。
(3)培養物中有少量細菌或真菌污染。
(4)試劑保存不當。
(5)接種細胞起始濃度太低。
(6)細胞已老化。
(7)支原體污染。

(1)比較新培養液與原培養液成分，比較新血清與舊血清支持細胞生長(cháng)實(shí)驗。讓細胞逐漸適應新培養液。
(2)換入新鮮配制培養液，或補加谷氨酰胺及生長(cháng)因子。
(3)用無(wú)抗生素培養液培養，如發(fā)現污染，丟棄培養物?；蛴每股爻?。
(4)血清需保存在-5℃到-20℃。培養液需在2-8℃避光保存。含血清*培養液在2-8℃保存，并在2周內用完。
(5)增加接種細胞起始濃度，換用新的保種細胞。
(7)分離培養物，檢測支原體。清潔支架和培養箱。如發(fā)現支原體污染，丟棄培養物。

(1)培養箱內無(wú)CO2。
(2)培養箱內溫度波動(dòng)太大。
(3)細胞凍存或復蘇過(guò)程中損傷。
(4)培養液滲透壓不正確。
(5)培養液種有毒代謝產(chǎn)物堆積。
(6)更多原因參考問(wèn)題4和問(wèn)題7。

(1)檢測培養箱內CO2。
(2)檢查培養箱內溫度。
(3)取新的保存細胞種。
(4)檢測培養液滲透壓。注意：大多數哺乳動(dòng)物細胞能耐受滲透壓為260– 350 mOsm/kg。加入額外試劑如HEPES或藥物都有可能影響培養液滲透壓。
(5)換入新鮮培養液。