HK-2細胞出現空泡是正常的嗎？

人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細胞系HK-2，取自正常成人腎臟的永生化近端小管上皮，通過(guò)轉入HPV-16 E6/E7基因構建而成，并在無(wú)血清培養基中持續生長(cháng)了一年多。HK-2的生長(cháng)依賴(lài)于表皮生長(cháng)因子EGF，保留了良好的PTCs的表型。

陽(yáng)性表達：堿性磷酸酶；γ-谷氨酰轉肽酶；亮氨酸氨肽酶；酸性磷酸酶；細胞角蛋白; α3β1 整合素；纖連蛋白。

陰性表達：因子VIII 相關(guān)抗原、6.19 抗原和 CALLA 內肽酶呈陰性。

在培養HK-2細胞的時(shí)候，常會(huì )出現一些細節問(wèn)題，不可掉以輕心。本文為大家總結培養HK-2細胞常見(jiàn)的問(wèn)題，以及解決方案。

空泡問(wèn)題需要結合生長(cháng)速度和形態(tài)來(lái)看：如果生長(cháng)速度和形態(tài)正常，空泡可能是正常的細胞活動(dòng)，傳代后空泡即可減輕。

如果生長(cháng)較慢，形態(tài)異常，空泡可能是自噬行為，可加大血清比例（不超過(guò)20%）或更換血清品牌改善細胞狀態(tài)。

細胞伸出細長(cháng)的絲有兩種情況：

第一種情況是細胞遷移造成的，細胞在培養皿上并不是靜態(tài)的，也會(huì )出現遷移。遷移時(shí)細胞的一部分滯留在原處，遷移的過(guò)程中會(huì )拉出一條細長(cháng)的絲。這種情況下拉絲的細胞占少數，細胞整體的生長(cháng)狀態(tài)是正常的，不用特殊處理。

第二種情況是營(yíng)養不良，拉絲的細胞占大多數，同時(shí)細胞生長(cháng)緩慢，此時(shí)可以提高血清比例（不超過(guò)20%）或添加5 ng/mL EGF。

正常的HK-2呈鋪路石狀生長(cháng)，如果細胞呈鐮刀狀或不規則狀（如下圖），可能是因為培養環(huán)境發(fā)生了較大的改變，比如從有血清到無(wú)血清的轉換，此時(shí)換回原來(lái)的培養條件細胞可逐漸恢復；如果細胞變得細長(cháng)，這時(shí)候可能是營(yíng)養不良。

在普諾賽標準培養條件（MEM+10%FBS+1%PS），以及1：3傳代條件下，HK-2的傳代周期約為3天。

當細胞生長(cháng)緩慢，一周無(wú)法傳代時(shí)，需要考慮培養基特別是血清是否合適。

選擇合適的培養基及血清，同時(shí)加大細胞接種密度可以改善。

HK-2最初建系使用無(wú)血清培養，眾多文獻以及實(shí)踐證明MEM、DMEM或DMEM/F12添加10%胎牛血清的條件下，HK-2也能良好生長(cháng)。

但胎牛血清的質(zhì)量是關(guān)鍵，胎牛血清品質(zhì)越高，HK-2狀態(tài)越好。

若使用無(wú)血清培養基培養，需要使用多聚賴(lài)氨酸或者明膠包被培養瓶，以促使貼壁。