如何快速測量細胞劃痕寬度？

細胞劃痕實(shí)驗可謂是性?xún)r(jià)比高的一個(gè)小實(shí)驗了?？梢栽诓活~外購買(mǎi)實(shí)驗設備的情況下，一定程度地評價(jià)腫瘤細胞或者成纖維細胞的遷移能力。

在課題組經(jīng)費的限制下，這個(gè)實(shí)驗成為很多老板的*。

細胞劃痕實(shí)驗本身的操作很簡(jiǎn)單，網(wǎng)上有很多教程，此處不贅述。當你辛辛苦苦拿到了下面這張照片時(shí)，說(shuō)明你已經(jīng)成功了一大半。

接下來(lái)的工作就是測量，本文將以此為例，寫(xiě)出測量的圖文教程。

1. 下載并安裝Image Pro Plus。

2. 點(diǎn)擊File→Open，打開(kāi)你需要測量的圖片。

3. 增強細胞劃痕邊界的信號，以提高IPP識別準確度。點(diǎn)擊Process，點(diǎn)擊過(guò)濾器Filters。

（4.1）在Edge選項下，選擇Sobel。然后鼠標拖右側的小窗口，將細胞劃痕的邊緣拖到這個(gè)窗口處，意在增強這個(gè)邊界。

點(diǎn)擊Apply之后，可以看到目標圖片已經(jīng)發(fā)生改變，邊界更加清晰了。

（4.2）在Morphological選項下，選擇Close。然后鼠標拖右側的小窗口，使得細胞占滿(mǎn)這個(gè)窗口。此步意在通過(guò)算法將細胞區域中的空隙都填充上顏色，以提高IPP的自動(dòng)識別準確度。

點(diǎn)擊Apply之后，可以看到目標圖片再次發(fā)生改變。

（4.3）在Enhancement選項下，選擇Lopass，選擇5X5，然后鼠標拖右側的小窗口，使得劃痕邊界處在這個(gè)窗口。此步驟意在調整劃痕邊界的平滑度。

點(diǎn)擊Apply之后，可以看到目標圖片又一次發(fā)生改變。

5. 增強圖片的對比度。

（5.1）點(diǎn)擊Enhance，選擇Contrast Enhancement，調出下面的設置界面彈窗。

（5.2）拉動(dòng)圖中的曲線(xiàn)，以獲取合適的對比度。（當然你也可以點(diǎn)擊彈窗中Save選項，保存這個(gè)對比度文件。后面測量其它圖片時(shí)，到了這一步可以點(diǎn)擊Load調出設置文件。這種操作更有利于減小測量誤差。）

6. 點(diǎn)擊矩形工具，將圖中的細胞寬度框選。如下圖。

7. 點(diǎn)擊Measure中的count/size選項，彈框中點(diǎn)擊measrue，再點(diǎn)擊select measurement。測量參數選擇Area和Box Height。調整Area最小測量值為1000，以便于過(guò)濾小面積區域。（注意：如果你的細胞劃痕圖像是橫著(zhù)的，那就要選擇Box width）。點(diǎn)擊OK。

8. 最關(guān)鍵的一步。在manual模式下，點(diǎn)擊select colors，進(jìn)入選色界面。在HSI模式下通過(guò)調整0-255數值或拉動(dòng)圖中曲線(xiàn)，保證我們畫(huà)的矩形選框中盡可能的被填滿(mǎn)紅色。

同樣的，你可以點(diǎn)擊彈窗中的File按鈕來(lái)保存你的設置文件，測量其它圖片時(shí)之間調用，以減小測量誤差。完成后點(diǎn)擊close。

9. 在count/size界面選擇Option，然后按照下圖進(jìn)行設置。最關(guān)鍵的是選擇filled。完成后點(diǎn)擊OK。

10. 點(diǎn)擊count，可以看到劃痕區域被選擇為多個(gè)測量區域，且存在一個(gè)最大測量區域被紅色全部充滿(mǎn)。這樣的測量才是符合的。

11. 點(diǎn)擊View，查看數據。其中最大面積及其對應的高度值就是我們需要的數據。

12. 細胞劃痕寬度

（eg，本例中細胞劃痕最大的測量面積是1954623，對應長(cháng)度為2531，那么細胞劃痕平均寬度就是772.3）

13. 測量單位的問(wèn)題

首先，你的所有圖片應該是在同一倍數的鏡下拍攝，一般10X。此時(shí)你采用IPP測量的寬度數值單位是“像素"，如果是多組間的比較，是否有單位對于組間比較無(wú)影響。

至于這個(gè)像素所代表的實(shí)際尺寸，則必須在該顯微鏡10X倍數下重新拍攝一個(gè)標尺，然后使用這個(gè)標尺進(jìn)行像素與尺寸的換算，最終得到細胞劃寬度的實(shí)際尺寸。

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