銷(xiāo)售熱線(xiàn)
                              
                19126518388
            
                              
        
                              
      
                              
      
                              
      
             
         
    
         
         

  
  
  
                              
    
                              
	  
                              
        
        
                              
 
                              
     
   
 
                               
         
                              
	   
                              
    
                              
  
                              
      

                              
  
                              
    
                                
      
                              • 
        
                                
        
                                
            
                                技術(shù)文章ARTICLE
                                
            
                                您當前的位置：首頁(yè) > 技術(shù)文章 > 變性凝膠電泳實(shí)驗
                                
          
                                
          
        
                                

                                
          
                                
            
                                
                
                                變性凝膠電泳實(shí)驗
                                
                
                                
                  發(fā)布時(shí)間： 2021-12-14　　點(diǎn)擊次數： 783次  
                
                                
                
                                
                 
                                材料與儀器

                                DNA
                                乙醇 異丙醇 二甲基二氯硅烷 TEMED 變性丙烯酰胺溶液 SDS
                                電泳儀 注射器 巴斯德吸管 干膠機

                                步驟

                                1.  制作每塊凝膠時(shí)，首先要用肥皂及水小心嚴格地清洗兩塊30 cm×40 cm的前后玻璃平板，用去離子水沖洗后晾干，用噴射洗瓶噴10%乙酵或異丙醇使平板濕海。

                                2.  然后用Kimwipe紙或其他無(wú)絨紙巾將平板擦干。

                                3.  戴手套在通風(fēng)櫥工作，用浸濕了含5%二甲基二氯硅烷的氯仿溶液的Kimwipe紙在每片平板的其中一面加一層此溶液，并小心洗擦拭整面平板。

                                4.  待硅化層干后，用Kimwipe紙以70%乙醇或異丙醇擦凈并干燥，最后再檢查平板有沒(méi)有灰塵或其他物質(zhì)。
                                 
                                5.  按廠(chǎng)商指南用0.2~0.4 mm 均厚的墊片和大的書(shū)本裝訂夾子組裝凝膠膠模夾層，注意墊片與平板的邊、底壓緊對齊。

                                6.  制作每塊凝膠時(shí)，在100 ml 燒杯配制60 ml 所需的變性丙烯酰胺凝膠溶液，在灌膠（步驟7）前，*混勻60 μl TEMED和0.6 ml 10%過(guò)硫酸銨于每份丙烯酰胺溶液中。
                                 
                                7.  立即灌膠，用60 ml 注射器小心吸出丙烯酰胺溶液，避免吸入氣泡，讓短平板朝上， 并使凝膠平板夾層與臬面成45度角，沿著(zhù)平板的一邊慢慢將丙烯酰胺溶液推入兩片平板之間，其間可調整角度讓膠液慢饅流入夾層的一邊。

                                8.  當溶液達到短平板的頂部時(shí)，放下膠模夾層至其頂部邊緣離操作臺平面仍有5 cm 左右，其下墊一空的吸頭盒或其他物件以使之保持較低的角度。

                                9.  將0.2~0.4 mm 厚的鯊魚(yú)齒樣品梳的平齊一側插入膠液中，至短平板下約2~3 mm，操作須十分小心以避免產(chǎn)生氣泡，用一個(gè)書(shū)本裝訂夾將平極之間的樣品梳夾緊，以避免在掩子與平板間形 成凝膠固塊。

                                10.  加一層過(guò)量的丙烯酰胺溶液至梳子，保證其被*覆蓋。用水沖洗注射器，除去過(guò)量的丙烯酰胺。

                                11.  除去每片膠模夾層的底部墊片或膠帶，用刀片除去樣品瓶周?chē)倪^(guò)量聚丙烯酰胺凝膠。

                                12.  用水清洗平板表面溢出的尿素和丙烯酰胺溶液，從每片膠模夾層中撥去鯊魚(yú)齒樣品梳，避免拉傷凝膠頂部。

                                13.  用水清洗梳子，準備好在步驟16操作時(shí)重新插回樣品孔。如果用常規樣品梳，小心防止撕裂聚丙烯酰胺加樣孔，
                                 
                                14.  凝膠電泳裝置的下層貯液槽加入1XTBE緩沖液，使凝膠夾層能浸泡在2~3 cm 的一層緩沖液中，放入凝膠夾層并用夾子固定在電泳裝置上。

                                15.  上層貯槽倒入1×TBE緩沖液，使超過(guò)凝膠頂部約3 cm，用巴斯德吸管或Beral細管以1×TBE清洗凝膠頂部。
                                 
                                16.  將清洗干凈的鯊魚(yú)齒樣品梳重新播回凝膠夾層，使其齒部?jì)H可觸及凝膠，用巴斯德吸管或Beral細管以1×TBE緩沖液*清洗加樣孔，以除去零星的聚丙烯酰胺碎片。
                                 
                                17.  加樣前，在45 V/cm 凝膠的電壓降下預電泳，使凝膠預熱，即在1 700 V，70 W 恒功率下電泳約30 min。

                                18.  在加樣前，清洗加樣孔除去浸進(jìn)孔中的尿素。
                                 
                                19.  在甲酰胺/染料溶液中的樣品，蓋好蓋子，在95℃加熱2 min，然后置于冰上，每孔加 樣2~3 μl 測序用的加樣吸頭可于每次加樣后在下槽緩沖液中沖洗2次后繼續使用。

                                20.  在45~70 W 恒功率下電泳，凝膠溫度保持在約65℃。

                                21.  高于此溫度可能會(huì )造成玻璃平板炸裂或條帶彌散，而太低溫度可使測序產(chǎn)物不*變性、現察標志染料的遷移以確定電泳時(shí)間。

                                22.  將干冰加入干膠機的冷阱并預熱至80℃。

                                23.  電泳完畢時(shí)，排出上下液槽的緩沖液，并按放射性廢物處理丟棄液體。

                                24.  從電泳裝置中取出凝膠夾層，并在冷自來(lái)水下沖洗直至兩面玻璃平板表面都冷卻為止，將夾層平放在紙巾上，四口玻璃平板（短平板）朝上，除去多余的液體及夾子、膠帶，取出一邊的墊片。

                                25.  兩片玻璃平板之間插入一個(gè)長(cháng)金屬鏟子，輕輕轉動(dòng)鏟于將玻璃 平板橇起使之分開(kāi)，凝膠應貼在下面的玻璃平板，如果貼在上面的平板，則將它翻轉過(guò)來(lái)。

                                26.  從插有鏟子的一邊饅慢提起上面的平板，遂漸增加角度直至上層平板*與凝膠分離。
                                 
                                27.  一旦平板分離后，取去另一邊的墊片及除去凝膠周?chē)嘤嗟木郾０匪槠?/div> 
                                28.  如果樣品含32P或33P，固定步驟可用可不用。如果樣品含33S，直接將凝膠連同玻璃平板一起放入淺托盤(pán)中，輕輕覆蓋一層約2 cm 的5%乙酸 / 5%甲醇固定液，浸泡10~15 min，不時(shí)輕輕搖動(dòng)托盤(pán)使凝膠與玻璃平板松開(kāi)。
                                 
                                29.  將疑膠重新置于平板上，靠吸力或重力除去固定液注意保持凝膠處于平極的中央， 小心從托盤(pán)中將平板連同凝膠取出，放在工作平臺上。

                                30.  將兩張干的轉印紙，疊齊如 同一張一祥，從凝膠的一端開(kāi)始緩慢地向另一端放下，貼在凝膠的表面，小心防止在紙和凝膠間形成氣泡。

                                31.  從平板上剝起轉印紙，凝膠應和它一起被揭起，逐漸卷起紙，而凝膠就同它一起被剝離平板。

                                32.  將濾紙和凝膠放在預熱的干膠機中，上面覆蓋一張保鮮瞑，80℃處理20 min ~1 h，使凝膠*干燥。
                                 
                                33.  從干膠上揭去保鮮膜，將干膠放在X光曝光盒中，Kodak XAR-5X光膠片直接與凝膠接觸，室溫放射自顯影，經(jīng)足夠時(shí)間曝光后（一般需過(guò)夜）取出X光膠片并沖印。

                                常見(jiàn)問(wèn)題
                                變性聚丙烯酰胺凝膠中相對于示蹤染料的寡核苷酸的遷移

                                變性聚丙烯酰胺凝膠中相對于示蹤染料的寡核苷酸的遷移

                                同實(shí)驗其他方法
                                電解質(zhì)梯度測序膠
                                1.  按基本方案步驟1~22灌制凝膠及進(jìn)行預電泳，但上槽緩沖液為0.5×TBE，下槽為1×TBE。 2.  按基本方案步驟23~26步準備樣品及加樣。   3.
                                含甲酰胺的測序膠
                                1.  按基本方案步驟1~5組裝凝膠平板夾層。   2.  按所需濃度配制甲酰胺凝膠溶液，加熱輕輕挽拌使之溶解，冷卻至30℃以下。 3.  加入0.15 ml TEMED
                                緩沖液梯度測序膠
                                1.  按基本方案步驟1~5組裝凝膠平板夾層。   2.  在2個(gè)100 ml 燒杯中，配制緩沖液梯度凝膠溶液：50 ml 用0.5×TBE配制，25 ml 用2.5×TBE配制
                                以上就是本期的內容，更多資訊，歡迎關(guān)注安培生物科技有限公司了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

                                安培生物科技有限公司介紹：
                                安培生物堅持為生命科學(xué)研究、活體動(dòng)物轉染、大規模生物生產(chǎn)、基因和細胞治療領(lǐng)域客戶(hù)，提供*細胞體內可代謝的核酸轉染試劑；inviCELL™Platelet lysate無(wú)動(dòng)物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產(chǎn)，包括培養間充質(zhì)干細胞和多種免疫細胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無(wú)血清細胞培養規模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無(wú)毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專(zhuān)注為生物醫藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細胞治療的生物科技企業(yè)。

                                
                
                                
                
            
                                
        
                                
     
                                
     
                                
   
                                
 
                                
 
                                • 

                              

  
                              
    
                              
	  
                              
	    
                              
        
                              
          產(chǎn)品中心
          Products
        
                              
        
                              
          
          
                              
        
                              
		
                              
      
                              

                              
 
 
  
                              
 
                              
    
    
                              

                              


 







 
  


中国凸偷窥XXXX自由视频妇科,99久久国产露脸国语对白,公交车强行挺进岳身体40，国产精品成人VA在线观看