如何養好SH-SY5Y細胞？

SH-SY5Y細胞于1970年構建，是骨瘤轉移灶的神經(jīng)母細胞瘤SK-N-SH細胞系經(jīng)3次克隆后得到的亞系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)。

如今，SH-SY5Y細胞已經(jīng)是科學(xué)研究中較為常用的細胞系之一了。

但很多人在養SH-SY5Y細胞的過(guò)程中，總會(huì )遇到各種問(wèn)題。今天，小編來(lái)為大家一一解答。

常溫運輸過(guò)程中，細胞不免受到震蕩和溫度變化的影響，出現皺縮、聚團甚至脫落的現象。

遇到這種情況，不用緊張，只要正確處理，細胞就能恢復正常生長(cháng)。

常溫細胞收貨后，把細胞放進(jìn)培養箱靜置2-4小時(shí)即可。

如果4小時(shí)后細胞仍然沒(méi)有鋪展開(kāi)，密度適中的前提下可以放培養箱中靜置過(guò)夜（過(guò)夜前倒出部分培養基，留5-10mL在瓶中，瓶蓋擰松）。

常溫細胞收貨后，先把細胞放進(jìn)培養箱靜置2-4小時(shí)以穩定狀態(tài)，再進(jìn)行傳代。

傳代用含EDTA的0.25%胰蛋白酶消化1-3min左右。

常溫細胞收貨后，先把細胞放進(jìn)培養箱靜置2-4小時(shí)以穩定狀態(tài)再處理。

脫落后的細胞通常聚團漂浮，通過(guò)離心將漂浮的細胞團收集起來(lái)，在離心管里進(jìn)行胰酶消化后重新鋪板即可。

貼壁細胞常規方法消化下來(lái)，和處理好的脫落細胞合并，混勻后鋪板。

SH-SY5Y細胞生長(cháng)較緩慢。在培養過(guò)程中，有以下幾點(diǎn)需要注意。

MEM/F12和DMEM/F12都可以培養SH-SY5Y，并且都有相應的文獻支持。但這兩種培養基培養出來(lái)的形態(tài)會(huì )有細微差異。

另外，使用品質(zhì)好的胎牛血清將極大改善細胞生長(cháng)狀態(tài)。

因其神經(jīng)母細胞瘤的特性，SH-SY5Y細胞成簇生長(cháng)，飽和密度大。

有時(shí)顯微鏡下看著(zhù)密度不高，但細胞簇實(shí)際密度大，所以培養基很快就變黃了。這時(shí)候，需及時(shí)換液。

當細胞培養一周都無(wú)法傳代時(shí)，可以將細胞消化下來(lái)，接種到更小的容器中，人為增加細胞密度，從而促進(jìn)細胞生長(cháng)。

平時(shí)傳代時(shí)也要注意接種密度不能太低。

不建議連續消化細胞，連續消化細胞會(huì )導致細胞狀態(tài)變差。

傳代時(shí)消化時(shí)間不宜過(guò)長(cháng)，通常1-3min即可，若細胞解離太快可適當用PBS稀釋胰酶。

吹打細胞時(shí)，動(dòng)作輕緩一些，減少對細胞的物理刺激。

▲ SH-SY5Y正常生長(cháng)照片

SH-SY5Y細胞培養時(shí)，貼壁細胞和懸浮細胞同時(shí)存在，貼壁細胞呈上皮樣，有短觸角延伸出來(lái)，傾向于成簇生長(cháng)，容易成團。

有文獻報道，SH-SY5Y在懸浮狀態(tài)也能維持生長(cháng)。

SH-SY5Y生長(cháng)時(shí)，大部分為貼壁細胞，少量為懸浮細胞。 如果SH-SY5Y出現大量懸浮的細胞，就需要引起注意了。

另外，SH-SY5Y細胞非常敏感，在受到溫度、化學(xué)或物理刺激后容易出現成團現象。

一個(gè)視野下，有少量成團現象，無(wú)需特殊處理。成團嚴重，幾乎沒(méi)有鋪展開(kāi)的細胞并且培養數天未展開(kāi)時(shí)，就需要按以下方法特殊處理一下了。

▲ 成團較嚴重的SH-SY5Y細胞