細胞培養的小常識

細胞體內外培養的差別是什么？

答：細胞離體后，失去了神經(jīng)體液的調節和細胞間的相互影響，生活在缺乏動(dòng)態(tài)平衡相對穩定環(huán)境中，日久天長(cháng)，易發(fā)生如下變化：分化現象減弱；形態(tài)功能趨于單一化或生存一定時(shí)間后衰退死亡；或發(fā)生轉化獲得不死性，變成可無(wú)限生長(cháng)的連續細胞系或惡性細胞系。因此，培養中的細胞可視為一種在特定的條件下的細胞群體，它們既保持著(zhù)與體內細胞相同的基本結構和功能，也有一些不同于體內細胞的性狀。實(shí)際上從細胞一旦被置于體外培養后，這種差異就開(kāi)始發(fā)生了。

二倍體細胞有什么特點(diǎn)？

答：二倍體細胞的染色體組型是2n核型；貼壁依賴(lài)接觸抑制；一般可傳代培養50代；無(wú)致瘤性。如W1-38：正常胚肺組織人二倍體細胞系。MRC-5：從正常男性肺組織中獲得的人二倍體細胞系。 

什么是動(dòng)物細胞大規模培養？                

答：所謂動(dòng)物細胞大規模培養技術(shù)（large-scale culture technology）是指在人工條件下（設定pH、溫度、溶氧等），在細胞生物反應器（bioreactor）中高密度大量培養動(dòng)物細胞用于生產(chǎn)生物制品的技術(shù)。目前可大規模培養的動(dòng)物細胞有雞胚、豬腎、猴腎、地鼠腎等多種原代細胞及人二倍體細胞、CHO（中華倉鼠卵巢）細胞、BHK-21、Vero細胞(非洲綠猴腎傳代細胞)等，并已成功生產(chǎn)了包括狂

犬病疫苗、口蹄疫疫苗、甲型肝炎疫苗、乙型肝炎疫苗、紅細胞生成素、單克隆抗體等產(chǎn)品。

在過(guò)去幾十年來(lái)，細胞培養技術(shù)經(jīng)有了很大發(fā)展，從使用轉瓶(roller bottle) 、CellCube等貼壁細胞培養，發(fā)展為生物反應器（Bioreactor）進(jìn)行大規模細胞培養。

培養基中添加了血清和抗生素后，可長(cháng)期保存嗎？

答：一旦您在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時(shí)，您應該在三到四周內使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開(kāi)始降解。

細胞培養基偶然被凍，可否繼續使用？

答：如果細胞培養基偶然被凍，您應該自然溶解培養基并觀(guān)察是否有沉淀產(chǎn)生。如果沒(méi)有沉淀產(chǎn)生，培養基可以正常使用，如果出現沉淀，只能丟棄這些培養基

培養基及其它添加物和試劑可反復凍融嗎？

答：大部分添加物和試劑最多可以?xún)鋈?次，如果次數過(guò)多會(huì )將使液體培養基的保存是冷藏好？還是冷凍好？

答：要冷藏??！通常液體培養基在冷藏條件下可存放6個(gè)月到一年。

CO2 培養箱之水盤(pán)如何保持清潔？

答：定期(至少每?jì)芍芤淮? 以無(wú)菌蒸餾水或無(wú)菌去離子水更換之。

購買(mǎi)之細胞冷凍管經(jīng)解凍后，為何會(huì )發(fā)生細胞數目太少之情形？

答：研究人員在冷凍細胞之培養時(shí)出現細胞數目太少，大都是因為離心過(guò)程操作上的失誤，造成細胞的物理性損傷，以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心，應待細胞生長(cháng)隔夜后再更換培養

購買(mǎi)之細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因？

答：研究人員在細胞培養時(shí)出現存活率不佳，原因比較復雜，常見(jiàn)原因可歸納為：培養基使用錯誤或培養基品質(zhì)不佳；血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳；解凍過(guò)程錯誤；冷凍細胞解凍后，加以洗滌細胞和離心；懸浮細胞誤認為死細胞；培養溫度使用錯誤；細胞置于–80 ℃太久等。建議嚴格參照ATCC或ECACC的標準操作規程進(jìn)行細胞復蘇、凍存等工作。

冷凍保存細胞之方法？

答：冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃（30－60 分鐘）→-20℃( 30 分鐘) → -80℃（16－18 小時(shí)或隔夜）→ 液氮罐長(cháng)期儲存。

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