細胞轉染率低，轉染試劑要全背鍋嗎？

目前細胞轉染技術(shù)主要分為三大類(lèi)：化學(xué)法、物理法及生物學(xué)法。但是沒(méi)有一種方法是通用并且準確無(wú)誤的，所以只有依據自己的實(shí)驗要求或者實(shí)驗探索選擇理想的方法，才能獲得漂亮的實(shí)驗結果。當然也可以在前輩們發(fā)的文獻中多看看，前車(chē)之鑒可以減少很多不必要的花費。

細胞轉染低都是轉染試劑的問(wèn)題嗎？純度不夠確實(shí)會(huì )有這樣的問(wèn)題，所以選擇轉染試劑很重要，其次還需要考慮以下幾點(diǎn)影響：

1. 其他微生物污染

您覺(jué)得您養的細胞 ，不，不，不 ，可能您只知道您養的是細胞，你不知道的是您的細胞可能背著(zhù)您養了一群小三，比如支原體，病毒，黑膠蟲(chóng)等等，特別是支原體它可以更改細胞的特性，穿透細胞膜進(jìn)行基因改造，培養幾代可能看不到“它"給細胞做的整容效果，但是隨著(zhù)代次的增多，細胞就慢慢體現出來(lái)了，“它"已經(jīng)變得不是從前的那個(gè)“它"了，所以建議在轉染之前進(jìn)行一次支原體檢測，如有支原體清除干凈再轉染。

2.交叉污染：

如果同時(shí)養了很多細胞，在操作的時(shí)候沒(méi)有規范化，然后不小心讓A細胞到B細胞家里走了個(gè)親戚，最后的結果可能就是A細胞和B細胞不離不棄，若B細胞比較強悍，可能會(huì )發(fā)生鳩占鵲巢的事情。所以操作的時(shí)候一定要注意，發(fā)生不明確的交叉污染，寧可錯殺一千，不要放過(guò)一個(gè)。

3.轉染高不高，時(shí)機很重要

轉染細胞真的沒(méi)有那么容易 ，想什么時(shí)候都可以，就像不尿急，占個(gè)廁所也拉不出來(lái)，相比非分裂的細胞—正在分裂的細胞往往會(huì )比靜止細胞更容易攝取并表達外源DNA，因此對大多數操作而言，細胞一般建議在轉染當天或者前一天種板，需要注意的是，鋪板細胞不宜過(guò)多，特別是瘋長(cháng)的癌細胞，因為如果細胞較多，甚至互相疊加，細胞自己都吃不飽，住不好，它也糟心的很，哪有時(shí)間和您玩轉染？

4. 抗生素和血清帶偏的轉染效果

本來(lái)想 ，能讓個(gè)細胞好好生長(cháng)不容易 ，為了防治心里覺(jué)得細胞可能產(chǎn)生的各種污染 ，于是給他們加上各種抗生素預防，比如青霉素和鏈霉素，在細胞轉染的時(shí)候，若含有這兩個(gè)組分，可增加細胞的通透性，導致轉染過(guò)低或者細胞全死亡，所以細胞它是不會(huì )說(shuō)話(huà) ，要是會(huì )說(shuō)話(huà)，肯定要罵我們了 ，好好的為啥一直給他們吃各種的藥。有些轉染技術(shù)如脂質(zhì)體轉染在有血清存在的情況下效率會(huì )很低，因此轉染前要去除血清。

5. 另外DNA不純，攜親戚上陣或內毒素超標，都會(huì )引起轉染效果偏低或者細胞死亡現象的發(fā)生，還是回到開(kāi)頭的那句話(huà)，選擇合適的試劑，多參考前輩們的意見(jiàn)。