WB過(guò)程中最重要的環(huán)節——轉膜

① 跑到溴酚藍距離最下緣 25px 時(shí)配電轉液（tris3.03g，甘氨酸 14.4g，甲醇 100ml，定容至 1L） 

② 在電轉液中剝膠，裁膠，剪膜，膜活化（甲醇 1min，去離子水 1min，電解液 15min） 

③ “三明治"黑板~海綿~三層濾紙~膠~膜（正面朝下，分清左右，與膠對應）~3 層濾紙~海綿 ~白板，夾緊后放入電轉槽中。（海綿，濾紙，膜需浸潤透，過(guò)程中不能干，趕趕氣泡） 

④ 連接電源，一定要注意紅對紅，黑對黑，定電流和時(shí)間（150mA，1h，若分子量大于 90， 再加 200mA，2h）具體情況具體分析

經(jīng)驗總結： 

溴酚藍跑到最終的距離是根據你所需要切的分子量決定的，假如你就只需要切一條 ACTIN(43Kda)這樣的，你*只需要跑到下膠，看到差不多 marker 分開(kāi)了就可以切膠了。假如你要從最上到最下切好多條出來(lái)，你則需要把溴酚藍盡量跑到最下面，這樣 marker 容易被跑開(kāi)，有利于切膠。濾紙和 PVDF 膜的裁剪必須要整齊，干凈，標記清晰。 PVDF 膜型號的選擇要正確。如正常的 30~170kDa 的分子一般需要孔徑 0.45mm 的膜就足夠了。太小的則需要選擇孔徑為 0.22mm 的膜。關(guān)于轉膜是否要加 SDS 的問(wèn)題。SDS 帶負電，加 SDS 一般是針對那些分子量大的 WB，加入 SDS 可以增加分子導電性，這樣更利于轉膜。 關(guān)于轉膜電流，分子是否能夠轉過(guò)去和轉膜時(shí)間沒(méi)有必要關(guān)系，而更在于轉膜電流的大小。 舉個(gè)例子，200kDa 的分子量，你用 90mAh 就算轉一年都轉不過(guò)去。