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血清知識——熱滅活血清如何處理？有必要對血清進(jìn)行熱滅活嗎？

發(fā)布時(shí)間： 2021-08-18　　點(diǎn)擊次數： 5818次

血清熱滅活

1. 為何會(huì )有熱滅活血清呢？

加熱可以滅活補體系統。啟動(dòng)的補體系統參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，啟動(dòng)淋巴細胞和巨噬細胞活化。在免疫學(xué)研究中，培養ES細胞、昆蟲(chóng)細胞和平滑肌細胞時(shí)，推薦使用熱滅活血清。

2. 血清熱滅活是否必要？

血清熱滅活的步驟在1970年代就已建立，至今成為很多實(shí)驗室的常規血清前處理步驟；但許多先前認為必須熱滅活的原因，卻早已經(jīng)不再成立：

●去除支原體污染?
早期血清加工使用的450nm濾膜，早已被100nm濾膜取代；且隨著(zhù)加工技術(shù)的創(chuàng )新及嚴格的監控，血清產(chǎn)品早已沒(méi)有支原體污染的疑慮。

●去除補體等對熱敏感的物質(zhì)?
胎牛血清中含有的補體僅為成年牛血清5-50％，而C3（補體中引起免疫反應的主成分）在胎牛血清中則幾乎不能檢出，直接使用血清對大多數的細胞株沒(méi)有負面影響。

實(shí)驗顯示，大多數的細胞不需要熱滅活血清，對于非必須的細胞來(lái)說(shuō)血清滅活對于細胞生長(cháng)只有微小甚至無(wú)任何作用，還可能造成生長(cháng)速率降低，沉淀物還會(huì )顯著(zhù)增多，不利于細胞觀(guān)察。因此，若非必須，不需要對血清進(jìn)行滅活處理。

3. 血清熱滅活對細胞生長(cháng)有幫助嗎？

細胞生物學(xué)家比較了正常熱滅活胎牛血清對各種細胞株的生長(cháng)能力影響，發(fā)現11株細胞中，熱滅活對6 株細胞有負面影響（紅）、3株無(wú)影響（綠）、2株有微弱正面改善（黃）。

血清知識——熱滅活血清如何處理？有必要對血清進(jìn)行熱滅活嗎？

▲ 使用未滅活或滅活血清的細胞生長(cháng)狀況

所以，在正常操作下，熱滅活通常對“細胞生長(cháng)"沒(méi)有明顯的促進(jìn)作用，反而會(huì )破壞血清內生長(cháng)因子，維生素，氨基酸等珍貴物質(zhì)，降低細胞增殖速度。

4. 血清熱滅活的缺點(diǎn)？

若實(shí)驗員設錯水浴溫度或忘記按計時(shí)器，都會(huì )導致過(guò)高的加熱溫度（下圖）或過(guò)長(cháng)的加熱時(shí)間（下圖），進(jìn)而大大降低血清的功能，影響細胞生長(cháng)的表現。

缺點(diǎn)1：

血清知識——熱滅活血清如何處理？有必要對血清進(jìn)行熱滅活嗎？

▲ 過(guò)高的加熱溫度降低大多細胞株生長(cháng)速度（僅一株未受明顯影響）

缺點(diǎn)2：

血清知識——熱滅活血清如何處理？有必要對血清進(jìn)行熱滅活嗎？

▲ 過(guò)長(cháng)的加熱時(shí)間降低大多細胞株生長(cháng)速度（僅一株未受明顯影響）

滅活加熱過(guò)程會(huì )增加血清的沉淀狀況，而沉淀又常常被認為是微生物的污染，進(jìn)而耗費大量時(shí)間及精力驗證是否污染，導致實(shí)驗一再拖延。

5. 若細胞一定要使用熱滅活血清怎么辦？

將需要進(jìn)行處理的血清置于56℃水浴30min，建議加放空白對照（同體積水）使用溫度計測溫，以測得溫度為56℃時(shí)為計時(shí)起始點(diǎn)，加熱中可不時(shí)輕度旋轉混勻血清。

在滅活過(guò)程中，除了需要嚴格監測加熱溫度及認真計算時(shí)間，還有幾個(gè)小技巧可以注意噢！

滅活時(shí)，水浴槽水面與血清液面等高！

使用水浴槽時(shí)，大多數人為避免血清瓶浮起來(lái)，會(huì )減少水浴槽內的水量，讓水面降低；數據顯示，降低水面也會(huì )使瓶?jì)燃訜岵痪?、拉長(cháng)加熱時(shí)間，增加血清破壞程度；所以還是建議將水浴槽內水量增加，讓水面與血清液面等高，讓血清最大面積的接觸水流，提高滅活效率！

血清知識——熱滅活血清如何處理？有必要對血清進(jìn)行熱滅活嗎？

▲ 對比圖

至于血清瓶漂浮的問(wèn)題，套上燒瓶用鉛環(huán)（下圖）就解決啦！

血清知識——熱滅活血清如何處理？有必要對血清進(jìn)行熱滅活嗎？

▲ 固定

滅活后，使用冷水浴降溫！　　

滅活后如果直接放在室溫或4度冰箱冷卻，僅靠空氣傳導散熱，冷卻效果差（下圖），使得實(shí)際降溫時(shí)間拉長(cháng)，對血清的影響較大；反之，流動(dòng)的冷水浴散熱速度較快，冷卻效果佳，縮短降溫時(shí)間的同時(shí)，也減少對血清的破壞。

血清知識——熱滅活血清如何處理？有必要對血清進(jìn)行熱滅活嗎？

▲ 對比圖

現代血清加工技術(shù)進(jìn)步，熱滅活已成為非必要步驟。熱滅活對細胞生長(cháng)沒(méi)有明顯促進(jìn)作用，反而會(huì )破壞血清、增加沉淀狀況。除非文獻指出該細胞必須使用滅活血清，一般細胞培養可省略血清熱滅活步驟。

如果必須使用滅活血清，加熱時(shí)水浴槽水面高度盡量與血清液面等高；滅活后使用冷水浴取代冰箱降溫，能大輻度減少對血清的破壞。直接選擇購買(mǎi)已滅活的血清產(chǎn)品，也是個(gè)好選擇噢！

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